巴马香猪肝硬化型的建立及其肠道菌群演替的研究.pdfVIP

两南Jj学硕十学伊论文 中文摘要 巴马香猪肝硬化模型的建立及其肠道菌群演替的研究 动物学专业硕士研究生陈玉龙 指导教师魏泓教授 摘要 背景 肝硬化是威胁人类健康的重要疾病之一，多种因素造成的慢性肝病和肝硬化 逐渐增多，肝硬化已成为消化学界的研究热点。目前肝移植是肝硬化和末期肝脏 疾病唯一的医疗方法，而免疫疗法、外科手术技能以及手术后的并发症需要作进 一步的研究，因此需要建立大型动物肝硬化模型以解决上述问题。 巴马香猪是我国特有的实验动物资源，具有近交程度高、遗传稳定、体型小、 性情温顺、易反复采样等特点。由于巴马香猪的解剖结构与人相似，因此很适合 用于器官移植、实验外科操作与研究：此外巴马香猪的食性、消化和生理特点以 及肠道菌群结构与人极为相似，与常用的大、小鼠相比，巴马香猪更适合用于模 拟人体疾病和肠道微生态学研究。 动物及人肠道内栖息着丰富的微生物菌群，与肠道环境形成一个相对动态平 衡、稳定的微生态系统，从消化吸收、免疫抗病等诸多方面影响着健康状况。而 近年来的研究结果显示，很多疾病如糖尿病、代谢综合征、慢性营养不良、肝硬 化等的发生发展往往伴随着肠道微生态结构的改变，因此伴随着疾病的产生而导 致的肠道菌群变化成为微生态研究的热点。 传统的微生物技术只能分析可培养的微生物，在研究微生物生态系统时存在 缺陷和不足，因此要准确评价肠道菌群的结构及演替变化规律就需其它方法的补 充，以16S gradient rDNA为基础的变性梯度凝胶电泳(denaturinggelelectrophoresis DGGE)技术具有直观、快速和高通量等优点，能有效反映复杂微生物区系全貌， 适合于分析复杂的微生物菌群。而16SrDNA扩增片段核苷酸序列分析技术，摆脱 了传统的纯种培养方法鉴定环境微生物。目前DGGE和16SrDNA技术已被广泛 应用于肠道微生态相关研究。 11 两南人学硕卜学伊论文 中文摘要 研究目的和意义 以巴马香猪为实验动物，通过注射外源性肝毒素ccl4橄榄油溶液，同时辅以 低蛋白高碳水化合物的饮食控制，构建一种稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝 硬化实验动物模型。研究肝硬化发生过程中其肠道菌群的演替变化，探讨肠道菌 群与肝硬化发生和发展的关系，为相关疾病和微生态的研究提供基础性数据和参 考。 研究方法 l腹腔注射40％的CCl4橄榄油溶液，以低蛋白高碳水化合物的玉米面为食， 同时以100,4的乙醇为唯一饮料 2利用PCR．DGGE技术分析肝硬化模型形成过程中巴马香猪肠道菌群的结构 变化及演替规律 3活菌计数 研究结果 1成功制备巴马香猪肝硬化模型 实验组lO头巴马香猪(6雄4雌)从三月龄开始通过复合造模法成功制备小 型猪肝硬化模型，与对照组相比其体型外观、体重以及肝功能指标都有显著性差 异，肝脏呈逐渐恶化的状态，HE染色显示成模后巴马香猪肝小叶不连续，并且出 现了被胶原性纤维包围的假小叶，其上广泛分布着严重的肝细胞脂肪性恶化坏死。 2巴马香猪肝硬化模型制备过程中肠道菌群结构发生明显变化 对照组肠道菌群的种类、数量和结构基本稳定，与对照组相比实验组在造模 过程中菌群在数量，种类以及复杂程度都发生了显著性改变，菌种数量增加明显， 后期出现了细菌过增长，菌群发生紊乱。 关键词：巴马香猪；肝硬化；肠道菌群；演替；变性梯度凝胶电泳 11I ananimal modeloflivercirrhosisin Develop Bama minitureand research its