极耐热性海藻糖酶的定向改造及其性质研究.pdfVIP

摘要 摘要 海藻糖被广泛应用于食品、医学、农业、生化制品和化妆品行业中。海藻糖合酶催 化麦芽糖生成海藻糖只需一种酶参与反应，该方法操作简单、成本低廉。本研究以来源 于嗜热栖热菌(Thermus HB8)中的热稳定性海藻糖合酶基因为研究对象， tlqermophilus III和 段进行定点突变，构建重组质粒pHsh4resY、pHsh-tresl、pHsh-trestI、pHsh-tres pHsh．tresIV。将上述重组质粒克隆到E．coli 1 U／mL，1．5U／mL， pHsh-tresY和pHsh—tresI—pHsh—tresB]中海藻糖合酶的酶活分别为O．3 2．1U／mL，2．9U／ml， 3．3U／mL，3．5 √盘 I口o E．coli 10 kDa，与理论 DEAE—Sepharose处理后，SDS结果表明海藻糖合酶的分子量为l 推算值相吻合，海藻糖台酶的纯度达到电泳纯。纯化后重组酶浓度为1620 mg／L，酶活 达至11272 U／ml，比酶活达Ni68 U／mg。纯化后海藻糖台酶的酶学性质研究表明，其最适 00的 Fd+、Cu2+的抑制作用更明显。搿+在低浓度条件下对酶活就有显著的抑制作用。 通过薄层色谱分析表明，海藻糖合酶粗酶液催化25raM麦芽糖反应21h后，在自制 硅胶板上，反应液和50mg／ml标准样品点样量均为ul，显色后结果表明麦芽糖、海藻 糖和葡萄糖能够有效分离．通过高效液相色谱法分析表明，纯化后的海藻糖合酶 达到1．57 1．5％。 mg／ml，此嗣麦芽糖的转化率达到3 关键词：Thermus HB8 thermophilus7海藻糖，海藻糖合酶(TreS)，高效表达 Abstract Absttract Trehalosehasusedinthe of and industry products cosmetic need onekindof to widerly．It e．．n刭me obtaindtrehalose throughcatalyzing maltose，andthismethodis to andits easyoperate costis oftrehalose cheaper．Thegene from Thermus HB8was synthase