深红红螺菌1.005菌株高产辅酶Qlt;,10gt;发酵工艺优化及诱变育种的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 辅酶Qlo是脂溶性多烯醌类化合物，与维生素类有共同特征，以极低的含量 广泛存在于许多亚细胞结构中。作为植物的光合作用和动物呼吸链中的递氢体， 在生物体中具有重要的生理功能。辅酶Qlo是细胞自身合成的天然抗氧化剂、细 胞代谢激活剂，并能提高机体免疫力，增强抗体的产生，改善T细胞的功能， 能抑制线粒体的过氧化，保护生物膜结构的完整性，在医药、保健品、食品添 种进行了优化，大幅度提高了该菌辅酶Qlo的发酵单位，主要研究结果有以下几 方面： 1、通过对深红红螺菌1．5005种子培养基的优化，．得出最佳种子培养基：麦 芽糖109／L、葡萄糖20∥L、尿素0．39／L、酵母膏69／L、NaHC03209／t、MgS04‘7H20 19／L、NaCl 59rL。深红红螺菌1．5005的生长过程符合典型的微生物生长曲线， 从32h到44h为对数期，菌体生长最旺盛，这时候可以作为生产菌种接入到发 酵培养基中。 2、通过发酵工艺的优化，得出深红红螺菌1．5005最佳发酵条件为：接种量 高了42．61％。 3、对深红红螺菌1．5005辅酶Qlo的提取纯化工艺进行了各方面的优化，最 佳破壁方法为碱辅助冻融破壁法，最适提取条件为：1M的氢氧化钠溶液常温处 理20 min，沸水浴4min，然后放入．36℃的冰箱中冷冻4h，冷冻结束后，迅速放 到沸水浴中融化，皂化温度80℃，皂化时间60min，蒸馏温度80℃，优化后辅 酶Q10的得率较优化前提高了52．71％。 4、研究了紫外线、亚硝基胍单因素对深红红螺菌1．5005的诱变效应，结果 表明：在功率为15W的紫外灯下，距离30cm处进行照射130S时，致死率为 95．9％；以浓度为0．2 mg／ml的NTP诱变处理40min时，致死率为96．94％。 5、深红红螺菌1．5005经过紫外一亚硝基胍复合诱变后，通过发酵实验，最 终选育得到了一株遗传稳定性良好的辅酶Qlo高产菌株UV6NTP4，其发酵产量 摘要 达到了33．344mg／L，是出发菌株的1．67倍。经连续传代5次后，并进行发酵实 验，结果证实菌株UV6NTP4产辅酶Q10的量具备良好的遗传稳定性。且辅酶 Qlo高产菌株UV6-NTP4比出发菌株提前4h进入对数生长期，缩短了发酵周期， 提高了辅酶Qlo的生产效率。 关键词：深红红螺菌；辅酶Q109发酵优化；提取纯化；诱变育种 Abstract is soluble of havecommon homolog，and Q10 compoundquinone Coenzymelipid with in subcellularstructures with exists characteristics vitamins，generallymany functionsasthe of microamount．it deliveryhydrogen important plays physiological of of andthe chainanimals．CoenzymeQ10 plants resp