棉花GhAQP和GhCYP1基因的克隆、表达及功能初步研究.pdfVIP

摘 要 棉花是一种全球性的经济作物，棉纤维作为重要的天然纤维，是纺织工业的 重要原材料。随着纺织业的发展，新的纺织技术对棉花的品质要求越来越高，培 育纤维长、强、细兼备的棉花品种是全世界棉花育种的主攻内容之一。利用基因 工程技术对棉花发育相关基因进行分离鉴定、表达调控分析，系统地解析棉花生 长发育调控的分子机理，对于提高棉花产量和改良品质具有重要的生物学理论意 义和实际应用价值。 水通道蛋白（aquaporin, AQP ）是定位于生物膜上的一类古老的通道蛋白， 能够高效运输水分，在整个植物生长发育和逆境应答中起重要作用。亲环素蛋白 （cyclophilin, CYP ）作为一类具有肽酰脯胺顺反异构酶（PPIase ）活性的多功能 蛋白家族，在植物生物学、细胞信号转导和胁迫应答等方面发挥重要作用。我们 从棉花中分离出1个编码AQP 的基因和1个编码CYP 的基因，本文主要对这两个基 因在棉花不同组织，不同发育天数的纤维中的表达情况以及功能进行初步分析， 该研究有望为利用基因工程改良棉花的品质提供重要地功能基因，研究结果如 下： 1．本实验室前期通过SSH技术从棉花cDNA文库中分离筛选出两个cDNA片 段，获得全长后分析发现这两个基因一个编码水通道蛋白，一个编码亲环素蛋白， 分别被命名为GhAQP2和GhCYP1。GhAQP2全长1310bp，含3个内含子，编码279 个氨基酸，同源比对分析发现其属于PIP2类。GhCYP1全长801bp，编码174个氨 基酸。 2. 通过半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术对两个基因在棉花不同器 官和不同发育天数纤维的表达进行分析，从表达特征来看，GhAQP2在根中有一 定量的表达，在茎、叶、花中少量表达，在胚珠和纤维细胞中表达受发育调控， 在开花后6-18天的纤维中持续高效表达，开花后21天开始表达量逐渐下降，表明 其可能参与了纤维的伸长发育。GhCYP1在根、茎、叶、花、胚珠和纤维细胞中 都表达，在叶以及开花后第15天的纤维中表达量最高。对GhCYP1基因在棉花干 旱胁迫不同时间长度的表达量进行检测，发现其在胁迫2小时后表达量达到最高， 6小时后表达量降低。 3.为初步探究GhAQP2基因的功能，构建了GhAQP2过表达载体。通过共培养 对烟草悬浮细胞BY-2进行转化，转基因的BY-2细胞与同步培养的野生型比较， 其生长周期变长，长度有所增长。以pUCm-T作为中间载体以及 PZP35S 作为最 终表达载体构建了GhAQP2基因的干扰表达载体，为研究其在棉花中的功能奠定 了基础。同时用pREP5N构建GhCYP1酵母表达载体，转化SPQ01裂殖酵母，转基 因酵母对干旱产生一定的抗性。 关键词：棉纤维；水通道蛋白；亲环素；基因表达；功能研究 I ABSTRACT Cotton is a global cash crop and cotton fiber is one of the most important raw textile materials in textile industry. As the development of textile industry and improvement of the textile technologies, longer, thinner and stronger fibers are needed badly. So quanlity improvement of cotton is the main emphasis for cotton breeding in the whole world. It has an important theoretical and practical meaning to unveil the cotton development mechanism to improve the cotton’s quantity and quality by genetic engineering to isolate corelative genes for cotton development, analyze its express