抗犊牛腹泻益生株的筛选及其产芽孢和产抗菌蛋白条件优化.pdfVIP

抗犊牛腹泻益生菌株的筛选及其产芽孢和产 抗菌蛋白条件优化 细胞生物学专业 研究生范会兰指导教师宗浩教授 coli)有较强抑 摘要从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌(Escherichia 制作用的芽孢杆菌，并对其进行鉴定。以大肠杆菌为指示菌进行初筛和复筛， 采用SPSS软件对复筛结果进行显著性分析，以选择抑制大肠杆菌活性较强的 rDNA全序列分析鉴定其种属；采 菌株，经过形态观察、生理生化试验和16S 用稀释活菌计数法测绘这些菌株的生长曲线，利用SPSS软件结合修正的 力学参数。经过鉴定，筛选得到的对大肠杆菌有较强抑制作用的4株牛源芽孢 杆菌均属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus 得到的生长曲线的相关系数(R)在0．985以上。筛选并鉴定了4株牛源肠道益 生菌；采用SPSS软件可以较准确地预测这些菌株的生长动力学参数。 BN一1 研究Ecoli拮抗菌株Bacillus 0菌株的最佳产芽孢条 amylofiquefaciens 件，以提高其芽孢生成率。采用单因素试验方法，选择益生菌BN．10菌株的适 宜碳源、氮源、无机盐；采用正交试验方法，结合SPSS软件进行极差分析和 一般线性模型分析，确定BN．10菌株的最适宜发酵培养基组成和最适宜发酵产 芽孢条件。BN．10菌株产芽孢的最适宜培养基组成及发酵条件为：蔗糖1．5％， 蛋白胨1．0％，MnS040．05％，CaCl2 6．0，种龄12h，接 0．01％；培养基初始pH h。通 过研究，获得了BN一10菌株产芽孢的最佳培养基组成和发酵条件，优化后BN．10 108cfu／mL。 菌株的芽孢生成率提高到98．70％，细菌数达到2．25x BN．1 对强烈抑制Ecoli的牛源肠道益生菌Bacillus 0菌株 amyloliquefaciens 产抗菌蛋白的发酵条件进行优化。利用单因素分析法，分别考察碳源、氮源和 无机盐对BN一10菌株发酵产抗菌蛋白的影响；结合培养基组成正交试验和发酵 条件正交试验，利用SPSS软件进行极差分析和一般线性模型分析，考察培养 基组成对发酵产抗菌蛋白的影响，确定适宜的发酵产蛋白条件。BN．10菌株产 抗菌蛋白的最佳培养基和发酵条件为：培养基组成为蔗糖含量2％，黄豆粕粉 6．0，种子液按2％接种量接 5％，ZnS04含量0．01％，KCl含量0．02％；初始pH 种至装瓶量为30mL／250mL的三角瓶中，200r·min-1，37℃培养24h。优化后， 表征抗菌蛋白产量的抑菌圈面积增大了65．20％。通过发酵条件的优化，获得了 BN．10菌株产抗菌蛋白的最佳培养基和发酵条件，抗菌蛋白的产量得到了明显 提高。 关键词：益生菌筛选芽孢抗菌蛋白 发酵SPSS分析 andIdentificationand of Screening Optimization Conditionsand