家蝇和日本沼虾氰酸生成酶基因功能研究.pdfVIP

ClassifiedIndex: CODE:10075 U.D.C.: NO. ADissertationfortheDegreeofM.Science FunctionsofRhodaneses inMuscadomestica andMacrobrachiumnipponense Candidate: LiXiang Supervisor: Prof.LiuFeng-Song Academi DegreeAppliedfor: MasterofScience Specialty: BiochemistryandMolecularBiology University: HebeiUniversity DateofOralExamination: June,2014 摘 要 摘 要 Muscadomestica 家蝇 （ ）属于节肢动物门昆虫纲双翅目蝇科蝇属，广泛分布于陆地 Macrobrachiumnipponense 各处。日本沼虾（ ）属于节肢动物门甲壳纲十足目长臂虾科沼 虾属，俗称青虾、河虾，广泛分布于中国、日本、东南亚和俄罗斯远东地区的淡水河湖 中。本文以陆生昆虫家蝇和水生甲壳动物日本沼虾为材料研究和比较其硫氰酸生成酶的 4 功能。本研究共分以下 个部分： 1 1 （）以本实验室前期研究获得的 条家蝇硫氰酸生成酶基因的氨基酸序列作为 querysequence，利用tBlastn程序在家蝇转录组和日本沼虾转录组中查找其同源序列。 BlastX SMART ORFFinder 随后使用 、 和 程序对获得的序列进行分析，最后确定了家蝇 5 3 Md-Rho1-5 的 条序列和日本沼虾的 条序列为硫氰酸生成酶样基因，并命名为 和 Mn-Rho1-3。使用CLCMainWorkbenc 5软件对获得的序列和其他物种的硫氰酸生成 酶、巯基丙酮酸硫转移酶和HSP67B2基因的氨基酸序列进行同源比对和进化树构建， 明确了硫氰酸生成酶之间的分子进化关系。 2 6 4 rMd-Rho1 （）成功构建了 种原核表达载体。获得了 种可溶性表达的重组蛋白 、 rMd-Rho4 rMn-Rho1 rMn-Rho2 2 、 和 ，并且均具有硫氰酸生成酶活性。还获得 种包涵体 rMd-Rho2 rMd-Rho3 2 形式存在的重组蛋白 和 ，经过变性复性过程之后，这 种重组蛋白 也表现出了硫氰酸生成酶活性。 3 GSTpulldown （）利用 技术筛选了与硫氰酸生成酶相互作用的蛋白质，结果显示 1 8