多杀菌素对甜菜蛾的作用受体及作用机制的初步研究.pdfVIP

摘要 多杀菌素类杀虫剂具有高效，安全，广谱等特点，是目前最具潜 力的生物杀虫剂之一。研究发现多杀菌素具有独特的杀虫机制，作用 时表现出神经毒剂特有的中毒症状。已有的研究认为多杀菌素主 要作用于烟碱型乙酰胆碱受体和1，．氨基丁酸受体，但是其具体的 作用机制并不明确。 本研究是以具有杀虫活性的多杀菌素浸润叶片喂食甜菜夜蛾，并 提取喂食24h的甜菜夜蛾总蛋白。通过比较多杀菌素处理与未处理的 甜菜夜蛾的蛋白质组的差异，解析多杀菌素对甜菜夜蛾的作用机制， 进而对多杀菌素受体蛋白进行初步研究。实验采用双向电泳技术 图谱进行斑点检测、分析，找到差异表达的蛋白，通过酶解消化，借 助质谱技术和生物信息学软件鉴定了多杀菌素处理与未处理的差异 表达蛋白，并对其功能进行了系统的分析。 通过实验，我们获得了多杀菌素处理以及对照的正常幼虫的 测分析，在相同条件下检测到的蛋白质斑点数分别为多杀菌素处理 355个，对照329个。经差异比较和显著性检验共得到25个差异蛋 白，其中多杀菌素处理后表达上调的蛋白点13个，表达下调的蛋白 点12个。由于蛋白质点低丰度及技术问题的局限，我们对部分差异 蛋白进行了质谱鉴定。实验鉴定到了12个表达差异较大的蛋白点 酶、蜕皮激素受体蛋白、肌动蛋白等。通过对差异蛋白的分析，发现 这些酶等蛋白分子与昆虫的生长发育以及对杀虫剂的应激反应和解 毒代谢等功能相关，为阐明多杀菌素的杀虫机理和甜菜夜蛾抗性机制 提供了重要依据。 为进一步研究这些蛋白与多杀菌素的作用，本研究选用V— 菌素混合使用，对甜菜夜蛾进行生测实验，结果显示加入巴佛洛霉素 A1后，多杀菌素杀虫活性提高，并对V．ATPase活性进行了测定， 结果显示通过抑制甜菜夜蛾VATPase的活性，使甜菜夜蛾对多杀菌 素更加敏感，说明VATPase可能与甜菜夜蛾对多杀菌素的抗性有关。 关键词：多杀菌素，甜菜夜蛾，双向电泳，质谱分析，V-ATPase II Abs仃act whichhas of isanovelinsecticide propertieshigh Spinosad insecticide becomesthemost efficency,safety,widespectrum，and insecticide modeofinsecticidalaction potentialbiological currently．The of is tothe irritatesinsect studies，spinosad spinosadunique．According neurons nicotinic also byactivating acetylcholine acid actingat),-aminobutyric specific actionmechanismisnotclear． leaveswithorwithout treatedtobeet Byfeeding spinosad extractedthetotal of armyworm(SpodopteraexiguaHubner)，we protein the beet