环境雌激素17-E2对栉孔扇贝内分泌干扰的作用机制.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Mechanisms for Endocrine Disrupting Effects of Environmental estrogens: 17βE in Chlamys - 2 farreri By Master candidate: Liu ying Tutor: Prof. Zhang peng Completed in Dalian OceanUniversity in May 29th, 2014 Commencement in June, 2014 摘要 摘要 环境内分泌干扰物 （Endocrine disrupting chemicals, EDCs ）是指能够影响生物体正常 内分泌行为的外源性化学物质。这些物质通过影响生物体体内激素的合成、贮存、分泌和 转运，使内分泌系统失调，进而阻碍或干扰繁殖、生长发育等正常生物功能。目前，有关 EDCs 影响或干扰生物内分泌的研究主要集中在脊椎动物。无脊椎动物占动物种类数的95% 以上，其研究主要是集中在有机锡污染导致螺类雄性化方面，而关于环境雌激素对无脊椎 动物内分泌影响的研究则相对缺乏。近年，各国相继发现沿海双壳类生物性腺组织发生性 畸变（雄性雌性化），这对无脊椎动物的繁殖、种群稳定和生态功能产生了潜在的危害。 因此，揭示双壳类发生性畸变的毒理机制是一个重要的环境科学问题，对加强环境 EDCs 的风险管理具有重要意义。 本研究以我国沿海广泛分布并具有重要经济价值的栉孔扇贝（Chlamys farreri ）为研究 对象，首先利用LC-MS/MS 分析了栉孔扇贝繁殖周期的内源激素水平变化，发现随着性腺 发育精巢组织中睾酮 （testosterone ，T ）由低到高达到一个峰值后降低，而雌二醇 （17β-estradiol, E ）的浓度水平随着性腺发育逐渐升高，但在成熟期之前急剧下降，并没 2 有表现出和性腺发育相同的趋势；而雌酮（estrone，E ）浓度水平明显低于E 和T，并且 1 2 在整个繁殖周期没有发生明显变化；卵巢组织中E2 水平明显高于精巢，并在成熟期达到最 高值，排卵后迅速下降，并与性腺发育周期变化相一致。而 T 的浓度水平呈现两个峰值。 另外，E1 的浓度水平较精巢略高。这些结果表明内源性激素与配子发育具有相关性。在此 基础上，对繁殖相关基因：Vtg 、ER 、CaM-1 和CaM-2mRNA 的表达水平进行定量，发现 Vtg 和CaMs mRNA 表达水平随性腺发育呈上升趋势，而ER mRNA 表达水平则始终保持 较低水平，说明雌激素的作用并不是通过ER 受体途径，而是可能存在其它的作用途径。 为了进一步探讨雌激素的作用机制，我们利用二代高通量测序技术（454 ）测定了暴 露于E2 条件下栉孔扇贝性腺的转录组，共得到了51997 个Unigene ，平均读长达626bp 。 差异基因表达的分析结果表明：60 个Unigene 在对照组与暴露组样品中具有明显的差异表 达，并有32 个unigenes （性腺）随着暴露浓度增加表达量增加。同时，此次数据库中也发 现了大量有关分子功能、细胞组分以及生物学过程如生长，发育，繁殖和信号转导的基因， 这为探索外源雌激素对软体动物的作用机制奠定了分子生物学基础。 关键词：栉孔扇贝；雌激素；机制；LC-MS/MS；454 测序； Ⅰ