毛竹MYB转录因子PeMYB2的克隆与功能分析（原版论文）.pdfVIP

选 HEREDITAS(Beijing)2013年10月 ISSN0253-9772 WWW．chinagene．ca 研究报告 DoI：10．3724／SP．J．1005．2013．01217 毛竹MYB转录因子PeMYB2的克隆与功能分析 肖冬长，张智俊，徐英武，杨丽，张凤雪，王超莉 浙江农林大学，亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，临安 311300 摘要：MYB类转录因子在调控逆境应答基因的表达起着重要的作用，是最大的植物转录因子之一。文章通过同 源基因克隆方法和RACE(Rapid．amplificationofcDNAends)技术，以毛竹幼苗为材料，获得一个MYB类转录因 子，命名PeMYB2。氨基酸序列分析表明，PeMYB2具有典型的R2R3．MYB特征，N端含有两个串联重复保守结 构域，C 端含有一个膜蛋 白DUF3651；进化树分析表明，PeMYB2与水稻 OsMYB18序列相似性最高，达到 85．98％；酵母单杂实验表明，PeMYB2具有转录激活功能。将 PeMYB2转化拟南芥对其功能进行分析，获得 7 株转基因纯合体植株。比较转基因和野生型拟南芥表型发现，PeMYB2的过量表达使转基因拟南芥出现矮化、 晚花的现象；非生物胁迫处理(盐胁迫、干旱胁迫、低温胁迫)结果表 明，转基因拟南芥中PeMYB2的过量表达， 导致转基因植株对盐胁迫和低温胁迫有更高的耐性，但是对低温胁迫的耐受性没有明显的变化；进一步通过盐 胁迫信号通路相关Marker基因(NXH1、SOS1、RD29A、COR15A)~定量PCR实验验证，发现PeMYB2对下游 这些抗逆基因的表达具有调控作用 上述实验结果表明，毛竹 PeMYB2可参与非生物胁迫调控，对毛竹盐胁迫 和低温胁迫的响应起着重要的作用。 关键词： 毛竹；PeMYB2；非生物胁迫；转基因 Cloningand functionalanalysisofPhyllostachysedulisMYB tran- scriptionfactorPeM YB2 XIAO Dong—Chang，ZHANGZhi-Jun，XU Ying-Wu，YANGLi，ZHANG Feng-Xue， Ⅵ NG ChaoLi StateKeyLaboratoryCultivationBaseofSubtropicalSilviculture，ZhejiangAgriculutreandForestryUniversity，Lin’an311300，China Abstract： MYB—typetranscriptionfactorisoncofthelargestfamiliesinplants，whichplaysimportnatrolesin accepting stresssignalsfrom environmentnad regulating theexpressionofstress-tolernatgenes．In thispaper,using homologouscloningandRACEtechnology,aMYB—typetrnascriptionfactor,designatedPeMYB2，wasclonedfromPhyl— tostachysedulis．TheresultsofbioinformaticsshowedhtatPeMYB2isatypicalR2R3一MYB．Itcontainedtwotandem re- peatsinitsN t·erminus，andamembrna eproteinDUF3651initsC-terminus．Inaddition，phylogeneticanalysisindicated htatPeMYB2sharedhtehighesthomoloyg wiht 85．98％ toOsMYB18proteinfrom Oryzasativaspp．Japonica．Inaddition， 收稿 日期：2013—04—23；修回 日期：2013—06—04 基金项 目：国家重点基础研究发展计划(973计划)项 目(编号：2011CBI11500)，浙江农林大学基础基金项 目(编号：2010FR072)和浙江省 自然科 学基金项 目(编号：Y307469)资助 作者简介：肖冬长，硕士研究生，专业方 向：生物技术与种质创新 。E-mail：xdc1115@163．corn 通讯作者：张智俊，副教授，研究方 向：生物技术与种质创新 。E．mai