肿瘤浸润性γδ1T细胞(γδ1TIL)CDR3δ1区的序列分析TCRγδ1+3δ1结合肿瘤抗原的分子结构与研究.pdf

北京协和医学院博．1：研究生论文 Y1985908 中文摘要 及 CDIb6l结合肿瘤抗原的分子结构研究 TC斟6l 博士研究生：姜燕 导师：何维教授、崔莲仙教授 丫6T细胞虽然在整个T细胞群体中所占的比例较少，但其作为固有免疫成员在 抗感染免疫、肿瘤免疫、免疫调节以及自身免疫等方面的作用日益成为人们关注的 热点。然而，较之apT细胞较为清楚的功能和结构研究，免疫学界对丫6T细胞受体 抗原配体及其识别肿瘤抗原的分子机制研究相比，人们对上皮粘膜中的V6l的研究 明显不足。 近年来，本实验室系统深入地研究了丫962T细胞识别的肿瘤抗原配体及其识别 的分子机制，并取得了一些重要的学术成果。前期结果显示，CDR362的侧翼序列 在TCR一62与肿瘤抗原结合中起关键作用IlJ。 本论文旨在进一步探讨丫6T细胞中另一大类上皮内丫61T细胞在肿瘤免疫中的 作用及其识别肿瘤抗原的分子机制。 首先用固相包被抗体，体外扩增了14例肿瘤组织(胃癌、肾癌、卵巢癌、膀 胱癌、食管癌、肺癌、嗜铬细胞瘤)和2例肿瘤腹水(浆乳癌)的丫6肿瘤浸润淋 ml仃ation 巴细胞(tumor 长(最高达98％)，主要为61亚型。 TCR 区序列有以下特征：一是丫6TIL CDR36l确实存在优势序列；二是不同个体的 同种组织来源的1，6TIL的CDR36l优势序列趋于相同，但也存在差异；三是不同组 的CDlU61优势序列相对较短。以上结果说明，识别相同组织来源肿瘤的丫6TIL的 CDR36l序列具有有限多样性，提示相同组织来源的肿瘤的表面抗原也可能具有有 续有关结构研究的基础。 北京协和医学院博f：研究生论文 blot检测胃癌细胞系 利用人工合成的CDR361(GTM)肽作为探针，Wbstem 层析分离BGC．823总蛋白，未能成功获得结合蛋白分子。 较强的杀伤功能。检测俩TIL分泌的细胞因子，结果显示所有TIL的IL6分泌水平 均较高；^r61TIL的GM．CSF因子分泌水平明显高于apTIL。 本实验的第二部分工作是探讨CDR36l各个结构域在抗原识别中的作用。主要 TC即异质二聚体的技术体系，来研究CDR36l与抗原特异性结合的分子结构基础。 免疫组化等方法，检测GTM肽及其突变肽与肿瘤细胞或组织的结合。结果显示， 结合活性变化不大，提示保守的CDR36l侧翼序列在抗原识别中起关键作用。 进而， 织的结合作用。结果与合成肽所得结果一致。进一步证明TCR丫46l与肿瘤抗原的相 互作用主要取决于其保守的侧翼序列。 移植型TCR异质二聚体的细胞，以期在细胞水平上模拟丫6lTIL识别肿瘤的分子机 制，检测CDR36l区不同结构域在肿瘤抗原识别中的作用。结果在转染 的细胞表面未见丫6TCR的表达。即使改变CDIU区各区突变氨基酸(将随机突变 染细胞膜表达。转染细胞的功能实验正在进行中。 综上所述，我们得出以下结论： Y6TIL，主要为61表型。在体外，扩增所获Y6lTIL对肿瘤细胞具有杀伤活性。 CDR36l序列具有相对优势特征。不同个体 2、体外扩增培养的Y6TIL的TCR 2 北京协和医学院博．Ij研究生论文 共有的CDR36l区优势序列GTM作为后续结构研究的基础。 3、采用随机突变的策略，在CDR36l短肽水平上、似6lT-Fc融合蛋白水平上， 证明CDR36l的侧翼序列(V、J区)是丫6lTCR识别肿瘤的关键区域。 以期在细胞水平上模拟丫6lTIL进而研究其识别肿瘤的分子机制。转染细胞的功能 实验正在进行中。