脱细胞神经支架修复坐骨神经缺损对脊髓前角运动神经元和GAP-43表达影响.pdfVIP

flrlflrllflfllllfflW ㈣『frlfflfflllffP Y1 目 录 一、摘 要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………3 二、英文缩略语………………………………………………………………………6 三、论文 前。占………………………………………………………………………………7日U看………………………………………………………………………………‘7 材料与方法………………………………………………………………………7 实验结果…………………………………………………………………………10 讨{念………………………………………………………………………………16 结论………………………………………………………………………………17 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………18 五、参考文献…………………………………………………………………………19 六、附录 综j态………………………………………………………………………………2l 致谢………………………………………………………………………………28 个人简介…………………………………………………………………………29 ·中文论著摘要· 脱细胞神经支架修复坐骨神经缺损对脊髓前角运动神 经元和GAP．43表达的影响 目 的 任何原因引起的坐骨神经损伤都能造成脊髓运动神经元变性或死亡，神经损 伤后能相继引起神经营养因子代谢紊乱。目前临床治疗周围神经损伤的方法很多， 本项研究是在以前的基础上对周围神经进行脱细胞处理，制备脱细胞神经基质移 植物。建立脱细胞神经基质移植物修复坐骨神经缺损模型，通过组织学、免疫组 织化学染色、免疫荧光和WesternBlot检测NeuN和生长相关蛋白．43在相应脊髓 节段的表达，观察GAP．43和NeuN在神经再生和轴突生长中的变化。探讨脱细 胞神经基质移植物对脊髓前角运动神经元的保护作用。 材料和方法 1、化学萃取脱细胞方法制备脱细胞神经基质移植物 选用Wistar大鼠10只，麻醉后取出双侧坐骨神经，采用化学萃取方法制备脱 细胞神经基质移植物。制备的脱细胞大鼠坐骨神经置于含100ug／ml庆大霉素和 100ug／ml链霉素的PBS(PH7．4)液中，4C下保存备用。 2、实验动物和分组 供。随机分为三组，正常组，实验组(脱细胞移植物桥接坐骨神经缺损组)，对 照组(坐骨神经缺损组)，每组10只。 3、取材和检测 动物饲养15天和1个月后，取各组相应节段脊髓(u卜L6节段)，进行免 疫荧光、免疫组织化学染色和WesternBlot，检测NeuN、GAP．43在脊髓内的表 达。 l 实验结果 l、在脊髓前角运动神经元内NeuN的表达：NeuN阳性神经元在术后一个月的 对照组中减少，同时实验组中的NeuN阳性神经元增多．脊髓前角NeuN阳性神经 照组缺损侧(5．97土1．69)仁L较，差异均有显著性(P0．05)． 2、GAP．43免疫组织化学染色结果显示：光镜下清晰可见脊髓GAP．43阳性 的运动神经元胞体及其突起染成棕黄色，胞核不着色。正常组偶见阳性染色，对 照组和实验组在术后15天后阳性细胞较多，染色深。30天后两组的GAP．43的表 达比15天低，而实验组比对照组的GAP-43的表达明显增高。 3、Westem Blot结果显示：对照组和实验组15天后GAP．43的阳性反应条 带明显加深，比正常组表达明显增高(枣木PO．01)，30天后仍维持