香菇菌丝原生质体分离与再生条件的研究.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)12(6)8-111990 香菇菌丝原生质体分离与再生条件的研究 廖汉泉 邱景芸 吴月嫦 广（东省微生物研究所，广州 ，10070) 在25-26℃下培养，-6天的菌丝体，以。.8moIlL甘露醇作为渗透压稳定剂，用 1.5%溶壁酶液 酶解1.5-2小时，所得原生质体的产量较高，最高可达4X10’个／ml以上。＿上述条件分离的原生质体， 再生率也较高。原生质体再生的温度以26℃为最佳。不·同的再生培养基明显地影响原生质休的再生 率。在完全培养基中加人kt皮浸出液可显著提高香菇菌丝原生质体的再生率，其中，以添加5% 皮浸 出液的效果最好。显微观察结果表明，在液体培养基中，香菇菌丝原生质体的再生是不同步的。一般要 培养20小时以后才能见到出芽，而且原生质体的再生形式也是多种多样的。 关键词：香菇，原生质体分离，溶壁酶 近十年来，原生质体融合技术作为杂交育 7H201.5g,蛋白陈2g，维生素B,0-01g,琼脂20g, 种的一种手段已引起人们越来越大的兴趣。目 水1000mlo(2)菌丝液体生长培养基：与 （1) 前，国内外的许多育种工作者正在利用这一技 同，不加琼脂。(3）原生质体再生培养基：各种 术从事食用菌方面的遗传育种研究幻‘，并已取 再生培养基列于表to 得了一定的成绩。在国内，食用菌原生质体融 3真菌细胞壁溶解酶 溶壁酶由本实验 合的研究正在广泛地开展。 室制备。 香菇是我国主要的食用菌之一，我们希望 4．渗透压稳定剂 氯化钾 A（.R.)，硫酸 通过细胞融合技术培育香菇的新品种。进行原 镁 A（.R.)，甘露醇 (A.R.)o 生质体融合，首先必须获得大量有活力的原生 二（）方法 质体，所以，就必须对原生质体的分离与再生条 1．菌丝培养 从单核菌丝斜面菌种中挑取 件做深人的研究。然而，迄今为止，关于香菇菌 若干菌丝置于盛有一定量无菌水和玻璃碎片的 丝原生质体分离与再生的研究，除了在国外有 小三角瓶中，充分摇动，使菌丝尽量切碎，从而 一些报道[4［.61外，在国内尚未见报道。本研究主 制得菌丝悬浮液。 吸取Iml菌丝悬浮液接入 要利用一种高效的真菌细胞壁溶解酶— 溶壁 装有20ml液体生长培养基的150m1三角瓶 酶 (Lywallzyme）作为脱壁酶，探索香菇菌丝 中，于25-26℃温箱中静置培养，经一定时间 原生质体分离与再生的较适条件。 后取出备用。 2.酶液配制 称取一定量的溶壁酶，用 材 料 与 方 法 蒸馏水配成3%的酶溶液，冷冻离心 （。℃， 一（）材料 20000转 ／分、20分钟或 12000转／分、30分钟） 1.．供试菌株 香菇 (Lentinusedodes) 后，取上清液用0.45y的微孔滤膜抽滤除菌，得 单核菌株 L（s)。 此菌株是通过收集香菇成熟 子实体的抱子，再经单抱分离而得 （图版1,1)o LiaoHanquanetal.:Studieson the Condittons 2.培养基 (1)菌丝斜面培养基：马铃 ofIsolation and RegenerationofProtoplasts from MyceliaofLenrinuredodes 薯 200g,葡萄糖 20g,KH2P043g,}IgS04· 本文于 199。年1月10日收到。 衰1服生质体再生培养基的代号及配方 ．．恤自．州．．．．舀翻．．．一 自．州．登阳7iH,0ERO1}3.WSg-I,,2Kg,HV,MP0,02.04g6,g,KR,1HP20g,,1-*.09g,}7J6B100,05m-g1