中度嗜盐细菌和端嗜盐古菌的分离与鉴定.pdf

摘 要 随着近年来对嗜盐菌研究力度的不断加大，不仅分离到越来越多新的菌种，而且随着 对嗜盐机理了解的逐渐加深和新菌株特性的不断发现，让我们认识到了嗜盐菌所具有的潜 在应用价值。其中能适应较广的盐浓度范围、分布广泛的中度嗜盐细菌和在极端盐浓度下 生长的、具有古菌特性的极端嗜盐古菌，分别以各自独具的优势，吸引着人们去分离出更 多、更具特色、更有生物技术应用潜力的菌株。 本研究是从江苏连云港和山西运城的高盐环境采集样品，进行嗜盐菌的分离和鉴定研 究。并对分离到的部分嗜盐菌株进行培养条件的确定、形态观察、生理生化测试，以及基 于 16S rDNA 基因序列的系统发育学分析等对其进行鉴定。 本研究共挑选了10 株光镜观察形态特殊的紫色中度嗜盐菌株进行了16S rDNA 基因测 序，通过与 GenBank 中所有已测的原核生物的 16S rDNA 序列进行比较，分析研究了它们 可能的归属， 结果发现：菌株 LYG 24、LYG 30、LYG 1 可能属于红弧菌属，与 Rhodovibrio salinarium 关系最近；菌株 LYG 4C 可能属于 Halomonas 属；菌株 LYG 10 和 BX 104 最类 似于 Salisaeta longa；菌株 LYG 20 和 LYG 9 可能属于碱螺菌属；菌株 LYG BX6 可能属 于 Marinobacter 菌属；菌株 LYG 8018，从系统发育树可以看出，是一个独立的分枝，不 属于任何一个菌属，而且和关系最近的 Rhodovibrio salinarium 菌株的相似性在 87 %。对菌 株 LYG 8018 进一步研究，确定其为革兰氏阴性弧菌，最适生长温度为 40 ℃，最适 NaCl 浓度是 12 % (w/v), 最适 pH 为 7.0，过氧化氢酶和氧化酶阳性，硝酸盐还原阳性，主要的 醌是 Q-10。通过表型特征、生化特征和分子生物学特征，认为菌株 LYG 8018 可能为中度 嗜盐菌 Rhodospirillaceae 科中新属的一个新种，欲命名为 Salinicurvata lianyungangensis gen. nov. sp. nov.。 共分离出 7 株极端嗜盐古菌，对其中的 2 株形态特殊的菌株进行了 16S rDNA 测序， 与 Genbank 中的类似序列进行多序列比对，认为菌株 DX 110 可能属于 Halorubrum 菌属， 与其最近的菌株是 Halorubrum lacusprofundi；菌株 DX 114 从系统发育树上来看，属于一 个独立的分枝，不隶属于目前任何一个菌属，并且与最近的菌属 Halorubrum 之间的相似 性在 83 %。通过进一步研究确定菌株 DX 114 为革兰氏阴性杆菌，最适生长温度为 40 ℃， 最适 NaCl 浓度是 3.4 M，最适 pH 为 7.5，最适 Mg2+ 浓度是 0.4 M。过氧化氢酶和氧化酶 阳性，硝酸盐还原阳性。通过表型特征、生化特征、以及分子生物学特征，初步认为菌株 DX 114 可能为极端嗜盐古菌 Halobacteriaceae 科中新属的一个新种，欲命名为 Haloroseus I lianyungangenisis gen. nov., sp.nov.. 对于从连云港盐池和运城盐湖分离得到的其它 130 多株菌株，准备通过对它们进行表 型筛选，PCR 测定其 16S rDNA 基因序列，并通过测序结果对有研究价值的菌株进行具体 的生理生化特征等鉴定，以期能够获得更多有应用价值的嗜盐菌株。 关键词：极端嗜盐古菌；中度嗜盐细菌；分离；鉴定。