乙烯利诱导棉花叶衰老及其甲基化敏感扩增多态性分析.pdf

摘要 子叶是研究植物衰老的良好的材料，乙烯促进植物组织的衰老。当前，关于乙 烯对棉花子叶衰老的研究较少。本研究用乙烯利处理棉花子叶，通过测定子叶中叶 绿素、POD、SOD、MDA和游离脯氨酸的牛理指标，研究乙烯对棉花子叶衰老的 影响；并采用MSAP技术，分析棉花子叶经乙烯利处理后，子叶基因组DNA的甲 基化水平和甲基化模式的变化，找出乙烯利诱导的甲基化差异片段，为从基因水平 上揭示乙烯调控棉花子叶衰老的机制提供理论依据。丰要研究结果如下： (1)不同浓度乙烯利处理棉花子叶(5d)后：随着乙烯利浓度的升高，子叶 的颜色由绿色渐渐变黄，直观的反映了叶绿素的含量也渐渐减少，子叶衰老加快。 同时显微观察表明，700 mg·L一-处理的子叶离层已经开始形成，表现出子叶的衰老。 (2)当300 d时，与对照相比，促进了SOD、 mg·LJ的乙烯利处理棉花子叶前3 POD的酶活力的升高，MDA含量上升的速度变缓，叶绿素含量的下降速度也减慢， 游离脯氨酸含量变化不明显；在300 d以后，与对照相比，其 mg·LJ乙烯利处理3 棉花子叶的SOD酶活力和叶绿素含量逐渐降低，POD酶活力虽然有所提高，但仍 低于对照，其MDA含量和游离脯氨酸含量表现为逐渐升高。 当500 mg·LJ和700mg·L。1的乙烯利处理棉花子叶时，二者生理指标都表现出 相似的变化趋势，即，SOD酶活力始终低于对照，并且持续降低，POD酶活力始 终低于对照，表现为缓慢上升，叶绿素含量始终低于对照，并不断降低，MDA和 游离脯氨酸含量持续升高，并且都高于对照。总之，乙烯利处理都加剧了棉花子叶 的衰老，只是衰老的程度在处理浓度和处理时间上有所不同，并且700 mg·L’1促进 衰老作用最为明显。 (3)MSAP体系的优化，确定了适合棉花子叶较适宜的预扩增反应体系和选 2 3 择性扩增反应体系，分别是模板DNA uL、 laL、10×Buffer(M92+)2laL、dNTPs 2 Taq酶0．2¨L、上下游引物各0．75pL和模板DNA dNTPs2．5 uL、上下游引物各1“L。 gL、Taq酶0．1 均低于对照(37．92％)。和对照相比，经300、500和700 mg·L。1乙烯利处理后，棉花 9．23％；并且随着乙烯利处理浓度的增加，棉花子叶DNA的 率为10．66％、9．84％年11 甲基化位点与去甲基化位点之比逐渐提高。对MSAP差异片段进行回收、测序、比 对，鉴定出17个可能与棉花子叶衰老相关的差异基因片段，包括果胶甲酯酶、乙醇 万方数据 脱氢酶基因、膜结合转录因子肽酶、细胞色素P450等。 关键词：棉花子叶，乙烯利，衰老，DNA甲基化，MSAP 万方数据 Abstract isa materialfor isan Cotyledons good studyingsenescence，Ethylene