转bt cryah和crylie基因抗虫玉米的研究.pdfVIP

摘 要 近年来，随着转基因作物种植面积的不断加大，昆虫产生抗性的问题已引起广泛关注。延缓 抗性产生的策略很多，其中最常用的是“高剂量／避难所”策略，但是由于国内农业的实际情况，“高 剂量／避难所”策略很难在我国得以实施，“多基因”策略则为我们治理抗性产生的问题提供了一条 新的途径。 Bt crylAh基因是从苏云金芽胞杆菌(Bacillus 蛋白基因，其编码蛋白对鳞翅目害虫的杀虫活性强于目前使用的crylA类基因，而crylle基因是 另一个具有自主知识产权的Bt杀虫基因，其编码蛋白对敏感玉米螟和抗性玉米螟均有一定毒力。 更为有效地克服现有Bt基因同源性高、种类单一、昆虫对Bt蛋白产生抗性等问题，以期获得抗 虫性更好的玉米新品种。 表达载体，通过Mlu I酶切回收三个表达盒片段，利用基因枪法转化玉米愈伤组织，以2mG2．epsps 为筛选标记基因，以草甘膦异丙胺盐作为筛选剂，共得到了48株再生植株，其中PCR阳性的有 37株，分别属于20个转化事件。通过To和Tl代PCR和Southernblot检测，证明了crylAh和 blot和ELISA分析， crylle基因已经整合到玉米基因组中，并稳定遗传。通过RT-PCR、Western 证明了两个基因能够正确的转录和表达。在不同的转基因株系中CrylAh蛋白的表达量有所差异， 基因的转基因玉米田问抗虫性要好于携带单基因的转基因玉米，可见两种Bt基因在转基因玉米 中能够协同作用，携带两种Bt基因的转基因植株比仅含其中一个基因的转基因植株对玉米螟有 更好的抗虫性。另外，本研究采用的是基因枪片段转化的方法，避免了多余的载体骨架序列进入 受体材料，提高了转基因作物的生物安全性，为进一步培育抗虫玉米新品种提供了参考。 关键词：crylAh基因；咧J尼基因；2mG2-epsps基因；转基因玉米 Abstract hasbeen in Withthe of resistance moreattentionrecent increasingtransgeniccrops．insect paid yeats． Therearelotsof to the ofinsect most used waysdelayappearanceresistance，including commonly is to difficultbe inChinaduetothe ‘high-dose／refuge’strategy．However,thisstrategy implemented to offersanew dealwiththe domestic stacking’strategy agriculturesituation．Therefore，“gene way insect of resistance． problem Wasanovelinsecticidal clonedfromaBacillus its Bt protein crylAh gene thuringiensisBT8，and gene