转基因水稻表达bt杀虫蛋白对拟环纹豹蛛(pardosa pseudoannulata)的安全性评价.pdfVIP

摘 要 为探明转基因水稻表达的Bt杀虫蛋白沿捕食性食物链传递过程 稻汕优63(简称Bt水稻)作为食物链中的生产者(以常规品种汕优 Bt杀虫蛋白在食物链中各营养级的传递规律及其对次级消费者拟环 纹豹蛛各生育期安全性的影响进行了探讨，现将所获得的研究结果报 告如下： 1．Bt杀虫蛋白在捕食性食物链中能够由生产者传递到次级消费 者体内 示：随着取食时间的延长，稻纵卷叶螟幼虫体内Bt蛋白含量逐渐增 减少并趋于维持在1．77±O．34ng／头的水平上，与此同时对照组均 未检测到Bt杀虫蛋白；以在Bt水稻上取食24h的稻纵卷叶螟幼虫为 猎物，分别待拟环纹豹蛛捕食2d、4d、6d、8d、lOd后测定蜘蛛体内 Bt蛋白含量，结果表明：随着捕食猎物数量的增加蜘蛛体内Bt杀虫 蛋白含量也逐渐增加，至捕食6天时达到最大值4．65±0．54ng／头， 而后蜘蛛体内Bt杀虫蛋白含量并不继续随捕食稻纵卷叶螟数量的增 加而增加，同时对照组均未检测到Bt蛋白。由此可见，转基因水稻 表达的Bt杀虫蛋白可以沿捕食性食物链经稻纵卷叶螟传递给拟环纹 豹蛛，并出现逐级富集现象，但这种富集并非随着捕食量的增加而持 续增加。 2．蜘蛛通过食物链摄入的Bt杀虫蛋白对其保护酶(SOD、POD幂I：I CAT)活性的影响 把取食Bt水稻叶片的稻纵卷叶螟幼虫，分别喂养拟环纹豹蛛3天、 6天、9天、12天后，采用酶活力测定方法探究了转基因水稻表达的Bt 杀虫蛋白对拟环纹豹蛛体内3种保护酶(SOD、POD和CAT)活性的影响。 活性均受到影响，且前期3种保护酶活性均表现不同程度的被抑制，明 显低于对照组。在实验过程中，其中SOD活性随着处理时间的增加而 逐渐增强，至处理第9天时达到最大值；同时处理组POD、CAT活性也 随着处理时间的增加而增强，实验初期(前6天)均显著低于对照组 (pO．05)，而至第9天则均高于对照组。由此可见，Bt基因在水稻 体内所表达的Bt杀虫蛋白能够沿食物链传递至次级消费者，并且对次 级消费者代谢活动的影响表现为对该保护酶在初期抑制，而中、后期 很快恢复或增高。 3．Bt杀虫蛋白对拟环纹豹蛛繁殖、生长发育及存活时间的影响 势自然天敌拟环纹豹蛛为对象，以取食Bt水稻叶片24h的稻纵卷叶 螟幼虫(对照组为取食对照水稻24h的稻纵卷叶螟幼虫)为猎物饲养 拟环纹豹蛛，待其产卵后统计产卵量、孵化率、幼蛛发育历期、成蛛 体重等。结果表明：处理组蜘蛛的发育历期长于对照组，成蛛体重小 于对照组，且均达到极显著差异水平(pO．01)；处理组蜘蛛的存 活时间显著长于对照(pO．05)，而蜘蛛的蜕皮次数与对照相比无 可见转基因水稻表达的Bt杀虫蛋白能沿食物链经靶标害虫稻纵卷叶 螟传递给蜘蛛，并使拟环纹豹蛛的发育历期、存活时间延长。 2S 4．Bt杀虫蛋白对拟环纹豹蛛线粒体DNA-1rRNA基因第三结 构域碱基序列的影响 为从分子水平上探讨转基因水稻表达的Bt杀虫蛋白对自然天敌 的长期生态效应，以线粒体DNA一12SrRNA基因第三结构域为目标区 域，研究了在转基因水稻表达的Bt杀虫蛋白的持续作用下拟环纹豹 熟蜘蛛)线粒体DNA-12SrRNA基因第三结构域的碱基组成及其序列 变化。结果表明：拟环纹豹蛛的该结构域中共检测到302个碱基，且 富含A、T，与对照相比较该结构域内的碱基未发生转换、颠换等改 变的现象。说明转基因水稻表达的Bt杀虫蛋白在该处理时间内(5 代)未导致拟环纹豹蛛线粒体DNA一12SrRNA基因第三结构域的碱基 序列发生变化。 III 综上所述，本研究结果表明：尽管转基因水稻表达的Bt杀虫蛋 白能够经过食物链传递到次级消费者蜘蛛体内，但Bt杀虫蛋白被蜘 蛛摄食后，由于蜘蛛对异源蛋白产生应激反应，经过代谢、降解和排 泄等作用，使该蛋白对蜘蛛在实验处理期内均无明显不利的生态效 应。由此作者认为：转Bt基因水稻对次级消费者蜘蛛的健康是相对 安全的。至于对高等动物是否安全有待于今后进一步研究。 关键词：转基因水稻，Bt蛋白，保护酶，食物链，线粒体DNA IV ABSTRACT To showtheeffectsoftheBt