HPV亚型与艾拉光动力治疗后复发率的相关性分析.docVIP

HPV亚型与艾拉光动力治疗后复发率的相关性分析 茅汉欣 尖锐湿疣是由HPV感染所产生的一种常见性传播疾病，目前临床常见治疗方法分为激光手术；外用药物以及近年来新发展起来的艾拉光动力治疗几种。治疗后疣体的去除率一般较好，但存在较高的复发率，即使以目前治疗复发率最低的光动力(PDT)来讲，一般文献数据仍高达10.77％－27.94％[1][2]，我们尝试从HPV感染亚型的角度来分析其与复发率的相应关系，以便为今后进一步进行研究做好准备。 资料与方法 1.1病例收集 选取2007年12月－2009年12月在上海新华医院集团堡镇人民医院性病门诊就诊病人；临床确诊为尖锐湿疣；选用艾拉光动力治疗；同时检测HPV亚型为阳性者共95例，全部为男性，初发者68例，年龄21-55岁，病程2周－2月，平均1.5月。复发者27例，年龄25-62岁，病程3月-12月，平均6月。部位：肛周6例，尿道口37例，包皮系带、冠状沟52例。所有患者均检测RPR和HIV－Ab，结果阴性。 1.2主要仪器和试剂 XD－635AB型光动力激光治疗仪（桂林兴达光电医疗器械有限公司）。基因扩增仪（美国MJ.OPTICON ，Research INC）。凯普医用核酸分子快速杂交仪（潮州凯普生物化学有限公司）。微量移液器（EPPENDORF）。TGL－16G型高速离心机（上海博通）。电热恒温水浴箱（上海博迅实业有限公司）。微量恒温器（绍兴卫星医疗设备制造有限公司）。5′－氨基酮戊酸（5－ALA，商品名：艾拉，上海复旦张江生物医药股份有限公司）。HPV分型试剂盒（潮州凯普生物化学有限公司）。 1.3方法 1.3.1艾拉光动力治疗：常规消毒疣体及周围组织，新鲜配制10％5－氨基酮戊酸溶液涂抹疣体及周围皮肤粘膜，胶带封包，避光，3小时后，去除外包胶带，抹去剩余药液，使用光动力仪照射。治疗仪总能量314.2J，能量密度100.0（J/CM2）输出功率261（MV），波长635（nm），照射距离10－15cm，照射时间20min /部位，每周一次，共3周为一疗程。疗程结束后随访三个月。 1.3.2HPV分型 1.3.2.1PCR提取 取500ul样本，以14000rpm离心5min，弃上清；加400ul溶液Ⅰ（先45℃水浴预热），混匀后沸水中煮15min；冷却后加入400ul溶液Ⅱ，混匀，室温静置2min,14000rpm离心5min;去上清；室温2min，加600ul溶液Ⅲ充分溶解，取1ul作PCR扩增。 1.3.2.2PCR扩增 取1ulDNA样本加24ulPremix和Taq酶混合液加入反应管中，95℃ 9min；按照95℃ 20s→55℃ 30s→72℃ 30s循环44℃；72℃ 5min。 1.3.2.3PCR杂交捕获 PCR扩增产物95℃变性5min；放置杂交膜，加0.5ml预热45℃的杂交液，加入PCR产物：45℃杂交10min，排尽杂交液；杂交液0.8ml冲洗三次，排尽杂交液；降温至25℃，加0.5ml封阻液，封闭5min，排尽封阻液；加0.5ml酶标液，盖板温育3.5min,排尽酶标液；加温至36℃，用0.8ml溶液A冲洗杂交膜3次，排尽溶液A；加0.5mlNBT/BCIP,盖板显色；显色5－10min；排尽NBT/BCIP,加1ml溶液B，冲洗3次，排尽溶液B；加1ml蒸馏水冲洗杂交膜，排尽蒸馏水，1h内结果判读， 结果 2.1光动力治疗结果 95例病例，经一个疗程治疗后，有81例经三个月随访，尚未见复发，判别为痊愈。14例经一个疗程治疗后出现复发，再进行第二个疗程治疗，其中13例经三月随访，未见再次复发；另外1例经四个疗程（共十二次治疗），仍出现复发，经激光治疗后，正随访中。 HPV分型结果 95例中，HPV-6 41例；HPV－11 39例；HPV-16 1例；HPV-52 1例；HPV-53 3例；HPV-66 1例；HPV-6和HPV-11混合型 6例；HPV-11和HPV－cp8304混合型2例； HPV-42 -52 -53 混合型1例。 光动力治疗后复发与HPV亚型相关结果（详见表1） 表1 HPV亚型感染与复发相关表 HPV亚型 感染例数 复发例数 HPV-6 41 6 HPV-11 39 3 HPV-16 1 HPV-52 1 HPV-53 3 3（1） HPV-66 1 HPV-6 -11 6 HPV-11 - cp8304 2 1 HPV-42 -52 -53 1 1 合计 95 14 14例复发病例中，HPV-6 6例；HPV-11 3例；HPV-53 3例；HPV-11 –cp8304混合型1例；HPV-42 -52 -53 混合型 1例。其中1例HPV-53 经四个疗程（共十二次治疗）