2015-2016学年高二生物习题：专题2 微生物的培养与应用 课题1《微生物的实验室培养》(人教版选修1).docVIP

课题1　微生物的实验室培养 一、培养基 1．概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2．种类 按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。 3．营养要素 各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 二、无菌技术 1．获得纯净培养物 关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒和灭菌 (1)消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物(不包括芽孢和孢子)。常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。 (2)灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。常见的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。 三、大肠杆菌的纯化培养 1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 2．纯化大肠杆菌 (1)纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。 (2)纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。 (3)平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其具体操作是： ①将接种环放在火焰上燃烧，直到接种环烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。 ③将试管口通过火焰。 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。 ⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。 ⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三到五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 ⑧将平板倒置放入培养箱中培养。 (4)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其操作步骤是： ①系列稀释(梯度稀释)操作： ②涂布平板操作： a．将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 b．取少量菌液，滴加到培养基表面。 c．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8 ～10 s。 d．用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。 3．菌种保藏的两种方法 一、选择题 1．下列有关培养基的叙述正确的是(A) A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌 解析：培养基除固体、液体培养基外，还有半固体培养基，B错误；固体培养基中加入了凝固剂，加入少量水仍为固体培养基，C错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌落，D错误。 2．有关培养基配制原则表述正确的是(C) A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素 C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受到pH、氧、渗透压的影响 D．营养物质的浓度越高越好 解析：培养自养型微生物时不需要添加碳源，培养固氮菌时可以不加氮源；一般来说，培养基中含量最多的是水；配制培养基时要合理控制营养物质的浓度，必须考虑微生物对渗透压的耐受能力。 3．下面对微生物培养中灭菌的理解不正确的是(B) A．防止杂菌污染 B．灭菌就是杀死培养基中的杂菌 C．培养基和培养设备都必须进行灭菌 D．灭菌必须在接种前 解析：灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。 4．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于(A) A．碳源 B．氮源 C．无机盐 D．生长因子 解析：自养型微生物主要包括进行光合作用或进行化能合成作用的微生物，他们能够利用CO2来合成自身所需的有机物；而异养型微生物主要是直接利用外界的有机物来合成自生所需的有机物，所以他们培养基的主要差别就在于自养型微生物主要是利用无机物中的碳，而异养型微生物主要是利用有机物中的碳。 5．下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是(A) A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C．将培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板 D．将平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置 解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，顺序