鲁西黄牛瘤胃高降解纤维素机制初步研究.pdf

山东大学硕士论文 摘要 生物质能源的开发与利用是当今世界各国普遍关注的热点问题。牛等反刍动 物的瘤胃是已知最高效的天然纤维素降解系统之一。鲁西黄牛是山东省特有的优 良畜牧品种，对干草、秸秆等粗饲料的消化能力强。深入研究鲁西黄牛瘤胃共生 微生物高效降解纤维素的机制，可能会为推动生物质能源大规模产业化这一远景 目标的实现提供新思路。 在本论文中，我们发现鲁西黄牛瘤胃液具有降解半纤维素、游离纤维素和结 晶纤维素底物的能力。与可高效降解纤维素的丝状真菌拟康氏木霉$38固体发酵 粗酶液相比，瘤胃液单位蛋白浓度的纤维素内切酶活力更高。瘤胃液中纤维素内 切酶的最适温度为50℃，最适pH值为6．0；半纤维素酶的最适温度为40-45℃， 最适pH值为5．0。通过改进的活性电泳技术，进一步发现瘤胃液中至少存在10 种木聚糖酶、12种纤维素内切酶、1种纤维素外切酶和2种D．葡萄糖苷酶组分。 通过观察鲁西黄牛瘤胃原位降解的CFll纤维素粉等纤维素底物的超微结构 发现，被降解的CFll纤维素粉表面会出现明显的凹槽，凹槽的底部会出现孔洞。 表面凹槽的宽度与黄色瘤胃球菌的直径接近。 利用纤维素酶对底物的吸附作用和分子筛柱层析技术，从瘤胃食糜中初步分 离得到一种大分子量、高质荷比且兼具多种糖苷水解酶活性的组分，这些性质都 与已经报道过的厌氧细菌产的纤维小体相似。但脱离了菌体的纤维小体富集液， 尽管表现出很高的CMCase酶活，却对结晶度较高的纤维素底物(如CFll纤维 素粉和滤纸)的降解能力下降，底物表面也看不到明显的凹槽和孔洞结构。 基于这些结果，我们认为鲁西黄牛瘤胃系统具有高效降解高结晶度的天然纤 维素底物的能力。推测这一高效机制首先依赖于其瘤胃中共生微生物所产的多种 糖苷水解酶，尤其是瘤胃球菌产的大分子量兼具多种糖苷水解酶活的纤维小体。 并且，瘤胃球菌可能通过滚动的方式，利用其表面的纤维小体打破结晶纤维素链， 进而逐步降解天然纤维素底物。瘤胃球菌一纤维小体复合体对降解结晶纤维素可 能是必须的，脱离了菌体的纤维小体将丧失大部分降解天然纤维素的能力。 关键词：纤维小体；瘤胃；鲁西黄牛；超微结构；纤维素酶 山东大学硕士论文 Abstract The andutilizationofbiomassis ahotissuewhich development energycurrently universalattentionfromallovertheworld．Rumenoftheruminantanimal attracted as efficientnatural for oneofthemost cellulose (suchcaRRie)is highly systems excellent foranimal in degradation．Luxi—Cattle，allspecies husbandryShandong in the as and Province，has hay strongabilitydigestingroughage(suchstraw)． ofthemechanismofLuxi-Cattlelumen’s in In—depthstudy highefficiencydegrading cellulose new intotheachievementofthe m