组织培养基本术语.docVIP

植物组织培养基本术语 胞质杂种：利用原生质体融合技术，使两种不同来源的核外遗传成分（细胞器）与一个特定的核基因组结合在一起，就形成胞质杂种。体细胞杂种和胞质杂种的鉴定方法：形态学，细胞学，分子遗传学。 玻璃化(vitrification)：玻璃化为试管苗的一种生理失调症状。当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明状，呈水浸状，这种现象通常称为玻璃化。它会使试管苗生长缓慢，繁殖系数有所下降。通过降低培养基的水势；减少培养基中含氮化合物的用量；增加光照强度；降低培养温度，进行变温培养；降低培养基中细胞分裂素含量等措施，均有助于减轻试管苗玻璃化现象的发生。 薄层养(tiny cell layer culture)：缩写为TCLC，亦称薄细胞层培养、薄细胞层组织培养。薄层培养于1970年由法国的Trgn Thanh Vav与Drira首先报道，它是用植物表皮与皮层的几层细胞作为外植体进行培养的一种组织培养方法。通过薄层培养能够比较理想地将离体细胞培养成花芽，故该实验系统一直为离体成花的研究者所重视。由于薄层培养在取材上具有一致性；外植体能够对培养环境做出较好的反应；操作用期相对较短，因此比较适合用来研究植物的离体细胞分化。 不定胚的诱导：组织片→含有2,4-D的培养基上→产生不定胚→去除2,4-D的培养基上→球型胚→心型胚→鱼雷型胚→植物体。不定芽的诱导：用BA诱导，在球、心、鱼雷时要去除BA。不对称融合：父母本在后代中贡献不同，射线处理，化学处理IOA（不影响核的分裂而影响细胞质分裂）即无菌接种完成后，送入培养室的外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎等中间繁殖体的过程。对称融合：父母均未处理，对后代贡献一样。其最大的特征是失去分裂能力。根芽激素理论：根和芽的分化由生长素和细胞分裂素的比率所决定，这一比率高时促进生根，比率低时促进茎芽的分化，比率适中时，组织则倾向于以一种无结构的方式生长。通过改变培养基中这两类生长调节物质的相对浓度可以控制器官的分化。 褐变：指在组培过程中，培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 花粉花药培养的意义：1、在单倍体细胞中只有一个染色体组，表现型和基因型一致，一旦发生突变，无论是显性还是隐性，在当代就可表现出来，因此单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。2、在品种间杂交育种过程中，通过F1代花药培养得到单倍体后，经染色体加倍立即成为纯合二倍体，从杂交到获得不分离的杂种后代单株只需要2个世代和常规育种相比，显著缩短了育种年限。花药培养步骤（用改良的NLN培养基）：F1代花药→形成小孢子→分离小孢子→形成愈伤组织→形成胚→单倍体植株→纯合二倍体花药培养方法：取材地点：大田和温室取材：大多采用单核期的花粉培养，因诱导产生愈伤组织或胚状体的频率较高。花粉时期的确定：常采用醋酸洋红-碘化钾染色，再压片镜检。实际操作中常根据花蕾长度、大小与花粉年龄的相关性确定。预处理：低温、高温或交叉处理培养基：有MS，Nitsch，Miller，B5和N6。低浓度的生长素和细胞分裂素相结合，高浓度的蔗糖对花粉的诱导生长有一定作用。培养基中加入活性炭对提高诱导频率也有一定效果。消毒、接种和培养：花药→在烧杯中研碎（有溶剂）→过滤→浓度梯度离心→收集中间层→离心单倍体的鉴定和加倍处理：单倍体用2％秋水仙素处理24小时，愈伤组织细胞自然加倍。茎尖：由顶端分生组织及其下方的1-3个叶原基一起构成的。茎尖分生组织：指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约100μm，最大长度为250μm。茎尖培养：切取茎的先端部分或茎的分生组织部分进行无菌培养。步骤：无菌培养的建立→芽的诱导→生根培养→试管苗的移栽（遗传变异）注意点：试管苗移栽过程中，由异养→自养，恒温→温差，无菌→有菌，光弱→光强，湿度高→湿度低，应该保持苗的水分平衡（加塑料薄膜和使用喷雾机），选择适当的基质，注意光、温的条件。茎尖培养脱毒：原理：病毒在植物体内的分布是不均匀的，在受感染的植物中顶端分生组织通常不含或仅含低浓度的病毒，其它的植物组织离茎尖的距离越远则病毒含量越高。影响茎尖培养脱毒效果的因素：培养基，外植体大小（脱毒效果跟外植体大小呈负相关，茎尖的成活率与茎尖大小呈正相关），贮存条件（光照培养优于暗培养），外植体的生理状态（活跃生长的芽，顶芽的效果比腋芽好，切割芽的时间）胚培养中的两个重要问题：1、胚剥离的方法：剥离的最佳时间是授粉后13-15天。2、培养基的成分：找到合适的培养基，在胚培养中加入蔗糖（能源、保持适当渗透压）。胚胎发生方式：1、直接胚胎发生（从培养物中的器官组织，细胞或原生质体直接分化成胚，中间不经过愈伤组织）2、