实验8微生物无菌接种分离和纯化.pptVIP

实验八 微生物无菌接种、分离和纯化技术 实验目的 学习和掌握微生物无菌接种技术 学习和掌握超净工作台的使用方法 学习和掌握涂布分离和划线分离等微生物分离纯化技术 实验原理 微生物无菌接种技术 在无菌条件下，用接种工具从原菌种中挑取少许菌体，接入到新培养基上扩大培养的技术 常用接种工具 接种环：划线、斜面转接、液体培养基 接种针：固体穿刺培养 接种勾：多用于丝状微生物转接 接种铲：多用于丝状微生物转接 无菌移液管： 液体培养基间的接种 回转螺旋 杆 手柄 实验原理 无菌接种技术的注意事项 要点：防止污染，严格的无菌操作 接种场所必须进行严格的消毒处理（接种间） 实验室：在超净工作台上进行 接种者的双手要进行消毒处理，一般用75%酒精或0.01%新洁而灭擦洗 接种工具、管、瓶口接种前后要通过灼烧灭菌 塞子不能脱手 实验原理 于接种之前打开接种室和超净工作台紫外灯消毒30min，同时打开风机 接种时必须关闭紫外灯 无菌接种技术的基本操作 转接斜面 （斜面接种） 演示：斜面转接 1、标记 2、左手持斜面 3、灼烧接种环 4、取塞，灼烧管口 5、冷却，取菌转接 6、重烧管口，盖塞 7、重烧接种环 微生物的分离纯化技术 分离：从混杂的群体中把各种微生物分开 纯化：进一步分离，得到纯培养物 菌落纯：由一个或几个相同种细胞所得到的群体 形态、结构、生物学特性基本相同的群体 研究一般特性 菌株纯：由一个细胞繁殖得到的后代（纯培养） 应用研究、生产 微生物的分离 常用菌种分离方法——固体平板分离 倒平板法 （Pour-plate Technique） 涂布平板法（Spread-Plate Technique） 平板划线法 （Streak-Plate Technique） 倒平板法 涂布平板法 1、取样 2、沾燃烧酒精 3、灼烧 4、涂布 平板划线法 分区划线分离要点： 仅第1次划线需要取菌。 其他每区划线之前一定要把残余的菌体烧掉；待接种环完全能却后通过前1区划线 相隔的区域不要交叉 接种环要在培养基表面划线，不要空划，也不要划破培养基 整个过程要无菌操作 实验内容 1、倒平板：每人倒至少2个牛肉膏蛋白胨平板 2、细菌斜面接种：每人1支，牛肉膏蛋白胨固体斜面培养基 3、涂布法分离混合微生物：每组4个牛肉膏蛋白胨平板，不同稀释度菌悬液 4、划线法纯化分离：每人一个牛肉膏蛋白胨平板 实验报告 1、培养基的配制和消毒灭菌（过程） 2、微生物的无菌接种、分离和纯化技术 3、结果：划线及涂布分离的效果 4、分析讨论 操作过程及结果中遇到的问题，解决方法 思考题 微生物接种时，采取哪些措施来防止杂菌污染？ 下一次预习 实验9和10 实验内容：细菌生理生化反应试验和pH对大肠杆菌生长的影响 * *