建立急性肝损伤模型.docxVIP

四氯化碳急性肝损伤模型 [造模原理] 四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水. CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积. [实验动物] 体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔. [操作方法] 用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1 [模型评价与注意事项] 1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性 好，价格低廉。 2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。 3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。 4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性 不如大鼠好。 5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护. 二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型 [造模原理] D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。D-半乳糖胺本身并无毒性,也不直接损伤肝细胞。它是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂,进入体内后与磷酸尿苷结合,形成磷酸尿苷一半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭。从而使依赖其生物合成的核???、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充,细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。另外，D-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即己糖代替了中性糖介人细胞膜，导致膜分子结构发生变化。 [模型评价与注意事项] 本方法简便,成功率高,重复性好,其病变仅限于肝脏,在引起肝坏死的剂量下,不引起其他脏器病变,对实验人员安全.因此D-半乳糖胺肝损伤模型是目前公认的研究病毒性肝炎发病机制和药物治疗效果的较好模型. 2．造成机性肝损伤所需D-半乳糖胺的剂量.因实验动物的状态和实验要求的不同而有差异.一般使用200、400、500或850mg／kg体重，预实验时应摸索确定。小鼠对D-半乳糖胺不甚敏感,腹腔和皮一卜注射的常用剂量均为800mg／kg体重。 3．D-半乳糖胺与CCl4所致肝损伤的组织学改变明显不同。CCl4损伤主要表现在肝小叶中央静脉周围区大量肝细胞坏死和出血，脂肪变性十分明显；而D-半乳糖胺引起的损伤则呈弥漫性、多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，细胞内有大量PAS染色阳性的毒性颗粒，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎的肝伤类似. 三、硫代乙酰胺急性肝损伤模型 [造模原理] 硫代乙酰胺(thioacetamide)可干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程，影响蛋白质的合成，也可能损害肝细胞膜，致使细胞的离子环境破坏，导致肝细胞坏死。 [模型评价与注意事项] 1.该模型可作为抗肝损伤药物的常规筛选模型，但目前其应用不如CCl4和D-半乳糖胺模型普遍。 2．雄性大鼠对硫代乙酰胺比雌性大鼠更敏感。 3.长时间喂饲小剂量硫代乙酰胺可造成慢性肝损伤模型，也可在食物和饮水中加入一定量硫代乙酰胺，2周后出现肝细胞变性，甚至出现肝硬化或肝癌。 四、刀豆蛋白A急性肝损伤模型 [造模原理] 刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)是一种植物蛋白，被广泛应用的可活化T淋巴细胞的丝裂原。Con A进入小鼠体内后，可引起与人类自身免疫性肝炎相似的肝损害.Con A诱发肝损害主要与下列因素有关：①活化T淋巴细胞、巨噬细胞、促进细胞因子释放.Con A与肝窦具有亲和性，使循环T淋巴细胞汇入肝窦并在局部增殖.肝窦内存在大量巨噬细胞，激活后产生的细胞因子可直接损伤肝细胞。大量活他的