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DissertationSubmittedto
for
Normal Master
Zhejiang University
ESTABLISHMENToFT-DNAINSERT
TRANSFORMANTSLIBRAR．Y、
BIOLOGICALCHARACTERS
ANDCLoNINGCITRININ
GENESINMoNASCUS
Candidate：Cao
Liling
Supervisor：JiangDonghuaSuDervlsor：Jlanl乏ongnua
Discipline：Botany
of andLifeScience
Chemistry
College
Normal
ZhejiangUniversity,Jinhua321004，Zhejiang
本论文得到
国家自然科学基金项目(No
资助
Theresearchwas theNaturalScience
supportedby
Foundationof 3127006
China(Grant1)
红曲霉T-DNA突变体库的构建、生物学
特性分析及桔霉素合成基因的克隆
摘要
红曲霉(Monascus)能分泌产生红曲色素(Monascus
pigment)、莫呐可琳类物质
Acid，GABA)、麦角固醇、异黄酮、不饱
(Monacolins)、丫．氨基丁酸(丫．Aminobutyric
和脂肪酸和丰富的水解酶类等多种有益生物活性物质，被广泛应用于食品和医药行业。
目前对红曲霉分子生物学方面的研究比较少。
Mp．41，根据优化后的根癌农杆菌介导的高效转化体系，建立了紫色红曲霉转化库，通
过对转化子的生物学特性进行分析筛选到一批变异较大的转化子，并对其主要代谢产物
．红曲色素和桔霉素进行初步研究。然后采用基因组PCR分析方法，从它们的基因组中
分别扩增到两条pksCT基因启动子区部分序列和终止子区部分序列片段。主要的研究结
果为：
1的突变体库
1、构建根癌农杆菌介导的菌株Mp．4
对影响转化的各因素进行优化，这些因素包括：菌株Mp．41的培养基种类、培养的时间
以及孢子液的浓度；根癌农杆菌的浓度；根癌农杆菌与菌株Mp．41共培养时所用膜的类
型、温度及共培养的时间；诱导剂乙酰丁香酮(AS)的浓度。优化后所建立的高效转化
d后收集制备浓度为104个孢
体系为：Mp．41菌株在葡萄糖乙醇培养基上30。C培养，20
u
子／mL的分生孢子悬浮液，诱导剂AS的浓度为100mol／L，根癌农杆菌的浓度为
最佳共培养时间为3d。根据此优化后的体系建立了含有1000多株转化子的突变体库。
2、转化子的潮霉素抗性PCR鉴定以及遗传稳定分析
在葡萄糖乙醇培养基上30℃培养突变库中的1000多株转化子，然后随机挑选60株转化
子在不含潮霉素B的葡萄糖乙醇培养基上培养7d，连续6代传代培养后，再在含200
用，观察记录转化子的生长情况，然后计算转化子的稳定性。提取转化子的DNA进行
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