柔红霉素与DNA作用的序列特异性研究.pdfVIP

Vo1．24 高 等 学 校 化 学 学报 NO．8 2003年 8月 CHEM ICALJOURNAL OF CHINESEUNIVERSITIES 1395～ 1399 柔红霉素与DNA作用的序列特异性研究 程圭芳，张冬梅 ，丁 敏 ，屈海云，何品刚，方禹之 (华东师范大学化学系，上海 200062) 摘要 采用紫外一可见光谱法和紫外一可见光谱 电化学法研究了柔红霉素 (DNR)与不同寡聚核苷酸之间的相 互作用．结果表明，DNR优先作用于寡聚核苷酸的CpG位点，然后是 ApG和ApC．因为DNR可与鸟嘌呤 之间形成 3个氢键．与双链寡聚核苷酸作用时，DNR最先插入的位点是 (CpG)碱基对之间．其次是 (TpG) (CpA)和 (GpC)(ApC)碱基对之间．当DNR与存在未配对 G碱基的DNA链作用时，因游离的DNR量增加 使其 电化学活性增加，导致DNA构象和构型的变化，使DNA生理功能受到损伤，DNA碱基增色效应显著 上升．此法可用于G碱基未配对 DNA链 的检测． 关键词 柔红霉素；蒽环类抗癌药物；DNA；序列特异性；光谱电化学 中图分类号 0657 文献标识码 A 文章编号 0251—0790(2003)08。1395。05 柔 红霉素 (DNR)是一种典型的蒽环类抗癌药物[ ，此类药物在体 内的作用主要有：(1)嵌入 DNA链 中，使DNA分子构象发生变化，抑制DNA 的复制和 RNA依赖的RNA酶的合成[。；(2)在 NADH脱氢酶作用下，还原产生半醌 自由基；同时在有氧条件下介导活性 自由基，如超氧阴离子 自由 基(02’)和羟基 自由基 (OH一)，引起细胞膜脂质过氧化，造成细胞毒性和心脏毒性[；(3)与线粒体 DNA，特别是与心磷脂DNA特异结合，生成复合体 I和 I，进而抑制呼吸酶的活性[阳和心脏毒性． 研究表 明，蒽环类药物对 DNA链 的嵌插作用与其抗癌活性之间有密切 的关系[引．但药物分子与 DNA的低特异性结合往往是其毒副作用的基础，鉴于 目前许多与DNA结合的药物作用序列特异性尚 属未知，尤其是从核酸的分子识别出发，包括序列选择性、位点专一性及形状选择性仍是当前药物研 究的热点之一[7]．Wang等[8]用x射线衍射方法研究了d(CGTACG)和柔红霉素加合物的性质，结果 表明，DNR能够嵌入 DNA小沟区中的GC部位．ChiresE们采用DNaseI足迹印记法研究后发现DNA 对 DNR的高亲和序列是CA，中度亲和位点是 GC，CG，CT，TC，CC和AC．Stfania等[采用 H NMR和。PNMR研究DNR等 3种系列衍生物在溶液中与寡聚核苷酸d(CGATCG)2和d(CGTACG)2 加合物的结构及加合过程的动力学，发现DNR的衍生物嵌在寡聚核苷酸AT碱基对之间，并且衍生 物的糖环处于DNA双螺旋的中间部位，所得结果与药物一DNA 固体加合物X射线衍射研究结果相反． 说明DNR和DNA作用的位点在溶液和固体状态下有很大的差异．药物进入体 内后代谢产生的中间 体和代谢产物与DNA作用机制往往是药物药理和毒理作用的主要因素． 光谱 电化学是一种新兴的交叉学科方法[1 ]，具备了光谱学和常规电化学方法的各 自优点，特别 适用于研究药物与DNA之间在模拟体 内代谢动态条件下的相互作用机理，因而可更详细地、全面地 了解药物作用的选择性及其药理和毒理作用．本文采用光谱电化学方法研究DNR与DNA作用的序 列特异性，可为药物临床应用提供有力依据．对临床医学研究和药理学研究具有重要意义． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 柔红霉素 (上海药物检验所提供，未经过进一步的提纯)；寡聚核苷酸 ssl(5GCGGCCGCGC 3 )，ss2(5 ATATATATAT 3 )，ss3(5 ATCACAGTTAAATTGC 3，)，ss4(5 GCAATT一 收稿 日期：2002—03—06． 基金项 目：国家 自然科学基金 (批准号 资助． 联系人简介：方禹之 (1931年出生)，男，教授，博士生导师，从事生物电化学、光谱电化学和毛细管电泳等方面的研究 高等 学