综述刘营.docVIP

反刍动物乳腺瘦素研究进展 1995年, Tartaglia 等第一次成功克隆了小鼠的瘦素受体基因，它定位于4号染色体的db位点上 。小鼠的瘦素受体是由894个氨基酸残基组成的蛋白质分子, 为跨膜受体，属于I类细胞因子受体家族，由3个位点组成: (1) 细胞外位点, 由840个氨基酸组成； (2) 跨膜位点, 含有34个氨基酸；(3) 多变的细胞内位点。目前至少发现5种瘦素受体的异形体，分别为Ob-Ra，Ob-Rb，Ob-Rc，Ob-Rd和Ob-Re。其中Ob-Re为可溶性受体，存在于血液循环中，作为转运蛋白；其余4种异形体均为单跨膜受体。这些异形体的胞外结构域、跨膜结构的全部及胞内结构域中的起始29个氨基酸的序列均相同，差异在于胞内结构域的长度。其中Ob-Rb异形体胞内结构域含303个氨基酸，称为长型受体，主要分布于下丘脑表达NPY的细胞表面，具有信号传递的功能，为效应受体，其余均为短型受体，不具备信号传递的功能。但是1997年Christian研究发现Ob-Ra在CHO细胞中也具有一定的信号转导能力。 1999年，Aoki等研究发现瘦素可以在乳腺组织中合成，是一个内分泌、旁分泌和自分泌因子。小鼠乳腺中瘦素基因表达在妊娠前可明显检测到，分娩后显著下降，在泌乳阶段维持在低水平，幼仔断奶后恢复到正常水平。2002年，Xinhu等研究发现在小鼠乳腺中瘦素缺失或瘦素受体缺失，乳腺导管分支减少。2003年，Mario等研究证明小鼠乳腺HC11细胞系表达瘦素和长型瘦素受体。高浓度的瘦素显著抑制细胞生长；瘦素还可影响β-酪蛋白表达。2004年，Motta 等研究发现瘦素可有效提高SOCS-1在小鼠乳腺HC11细胞系的表达，在转染pβCAT的HC11中，高浓度瘦素明显减少IL-6和TNF-α的抑制效应。2002年，Bonnet等对绵羊乳腺进行研究发现瘦素mRNA水平在妊娠80天到141天明显下降，在整个泌乳阶段，瘦素mRNA处于低水平。在早期妊娠阶段，瘦素mRNA主要定位于脂肪细胞的细胞质中，在妊娠晚期，瘦素mRNA荧光标记位于上皮细胞膜的顶点，分娩后30分钟，瘦素mRNA连续围绕在腺泡边缘，到泌乳70天，瘦素mRNA在腺泡边缘的表达变得不连续 。Silva等对牛乳腺进行研究发现牛乳腺上皮细胞中表达长型瘦素受体（Ob-Rb），长402bp，含有Mse I酶切位点。瘦素可减少牛乳腺上皮细胞中DNA的合成，其最佳剂量为64ng/ml，直接通过受体激活来抑制增殖，在乳腺实体组织发育中具有调节作用。另外乳腺上皮细胞系MAC-T也表达Ob-Rb。瘦素抑制乳腺上皮细胞的增殖是通过信号转导子和转录激活子Stat的激活实现的。磷酸化的Stat可二聚体化并迁移到核中，起转录因子的作用。瘦素受体信号也可能导致IGFBP分泌的增加，引起生长的间接抑制，然而这些还有待于验证。Sayed-Ahmed等研究发现乳腺上皮细胞中瘦素的表达在泌乳期比干乳期高，而且乳腺上皮细胞中也表达短型受体（Ob-Ra），表明瘦素直接参与乳腺上皮细胞功能的调节和维持。Sayed-Ahmed等对埃及水牛进行研究也发现，乳腺上皮细胞表达瘦素、Ob-Ra与Ob-Rb，说明瘦素可能是乳腺新陈代谢的自分泌和旁分泌调节因子以及泌乳过程中腺泡上皮细胞活性的调节因子。 瘦素受体主要通过JAK－STAT通路调控靶基因的转录,也可通过MAPK和PI3-K通路传递信号。完整OB-R 在结构上存在着JAK的结合位点(box1, box2) 和可诱导STAT3磷酸化的特异性区域box3, 即YXXQ序列, 可激活JAK2-STAT通路、调节靶基因的转录,具有信号能力;OB-Ra 的信号能力尚不能肯定,虽然它在结构上存在着box1区,可激活JAK,但不能磷酸化STAT。研究表明,表达有OB-R的COS细胞系上OB-Rb在结合配体后可激活STAT3和STAT5,对STAT1和STAT6的激活有不同看法；OB-Ra则不能激活STAT。对稳定表达OB-Rb的肝细胞系研究表明,OB-Rb细胞内信号传递与IL-6受体相似,可激活STAT1、3、5。瘦素可刺激小鼠下丘脑STAT3的DNA结合活性,且呈剂量依赖性；正常SD大鼠下腔静脉注射瘦素可致其下丘脑STAT3磷酸化,且呈时间依赖性,注射5 min上升,30 min达到高峰。遗传性肥胖fa大鼠的OB-R 由于其基因发生A-C突变致第269位氨基酸由谷氨酰胺突变为脯氨酸,使受体在细胞表面的表达量下降。转染fa OB-R 的GT1-7 (小鼠下丘脑细胞系) 和COS-7细胞系,与转染野生型OB-R相比,其转染受体的表达量明显减少,配体的结合位点减少,但faOB-R也有激活STAT1和3的能力,说明信号传递需要完整的OB-R胞内段。由上述资料可推论,胞内长片段受体是瘦素发挥作用的主要形