真养产碱菌中二个和聚β-羟基丁酸生物合成有关的基因的克隆.pdf

摘 要 ， m6)中，聚e羟基丁酸(VHB) !在真氧产碱菌H16菌株(Alcalige捍嚣eutrophus 的合成过程是；乙酰CoA经3．酮酯酰CoA硫解酶的催化生成乙酰乙酰CoA， 乙酰乙酰CoA经乙酰转移酶的催化生成3一羟基丁酰CoA，3-羟基丁酰CoA再 经PHB合成酶的催化生成产物聚B．羟基丁酸(PHB)。 对应于这三种酶的三个基因分别为：①phbA--}3．酮酯酰CoA硫解酶② 个启动子负责其转录。这段包括启动子在内的三个酶的基因的DNA序列长约 4．2kb．卜’、d一、，一一 本工作可分为两个部分。第一部分是通过资料找到此4．2kb片段的DNA序 用PCR分段克隆的办法得到phbA和phbB两基因，并将二者连接刭T质粒上 转入大肠杆菌JMl09中。 第二部分是用PCR扩增出分别位于4．2kb片段头和尾的两段约1．0kb的DNA Southern杂交，两探针杂交结果相同，都在同一位置出现唯一的杂交信号，因 片段。 关键词： 文库?Southern杂交：原位杂交?大肠杆菌。 Abst