生物化学与分子生物学技术原理126.ppt

* SWAU ②、测量相对迁移率(Rf):分离区带的泳动速度可用相对迁移率来表示。测定迁移率时，在电泳结束后要先在指示剂移动的位置(前沿)作一标记(通常是插一根短铜丝)，染色后，量出指示剂移动的距离和酶带移动的距离。 Rf＝ 谱带迁移距离/ 前沿指示剂迁移距离 测量迁移率时，应以谱带的中部位置为准，值得注意的是，交联剂的浓度，交联剂和丙烯酰胺的比例，催化剂浓度及聚胶时的温度和时间均对凝胶柱结构有影响，因而会影响迁移率。另外，电泳时电场强度等也会影响带电颗粒迁移速度。为了使试验重复性好，这些因子都应尽可能保持恒定。 * SWAU ③照相：采用透射照相方法，用照相机把谱带真实地拍摄下来，盘状电泳的凝胶柱一般放在试管中(注满脱色液或保存液)拍摄。对于绿色、蓝色和暗蓝色的染色区带，照相时可加黄滤色镜，能增加清晰度。 ④光密度计扫描定量：把谱带放在光密度扫描仪上，描绘谱带——光密度曲线。配合计算机，可作定量分析。 * SWAU 第四节 SDS一、原理 SDS(sodium dodecyl sulfate)，H25C12NaSO4 M＝288.38g/mol，是一种很强的阴离子表面活性剂。SDS能破坏蛋白质分子间的结构(尤其是在强还原剂如巯基乙醇存在下，使蛋白质分子内的二硫键还原打开)，并以其疏水基和蛋白质分子的疏水区相结合，形成牢固的带负电荷的蛋白质-SDS复合物。在