猪o型口蹄疫新基因工程疫苗毒株的构建论文33514.docVIP

目 录 摘 要 III 关键词 III Abstract III Key words III 英文缩略词表 IV 1前言 1 1.1口蹄疫的基本特征 1 1.1.1口蹄疫病毒基本概念 1 1.1.2口蹄疫病毒生物学特征 1 1.1.3口蹄疫病毒危害 1 1.2泛素蛋白及其对抗原的影响 2 1.3 siRNA干扰机制 3 1.4 γ干扰素与口蹄疫免疫 4 1.5 FMD疫苗研究进展 5 1.6本实验研究的目的与意义 6 2实验材料 6 2.1菌种、毒株、载体与质粒 6 2.2主要药品与试剂 6 2.3主要培养基及配制 7 2.4缓冲液及其配制 7 2.5其他溶液 7 2.5空斑筛选与纯化相关试剂 8 2.6寡核苷酸引物 8 3实验方法 8 3.1转移载体PIECMVUbiP1P1SiFIFNγ的构建策略 8 3.1.1限制性内切酶酶切反应 9 3.1.2酶切产物的琼脂糖凝胶电泳检测 9 3.1.3酶切产物的回收 9 3.1.4回收产物的去磷酸化反应 9 3.1.5目的基因与载体的酶连反应 9 3.2 感受态细胞的制备、质粒的转化、质粒制备与纯化 10 3.2.1大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） 10 3.2.2质粒的转化 10 3.2.3质粒的小量制备（OMEGA试剂盒） 10 3.2.4质粒的大量制备（OMEGA试剂盒） 11 3.2.5阳性质粒的酶切鉴定 11 3.3以PRV