《硅胶柱层析》.docVIP

硅胶柱层析 　　硅胶柱层析原理 　　硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。 　　硅胶柱层析流动相 　　极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸 　　硅胶柱层析惯用方法 　　1.称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。 　　2.搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。 　　3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。 　　4.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。 　　5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。 　　6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。 　　7.检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。 8.送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰硅胶柱清洗方法正相的我们一般都只使用一次，反相的才反复使用。 在做实验时我们用硅胶装的玻璃柱在使用时一般都是一次性的，但如应用至规模化生产时这样的操作不免很浪费，可以想像，一根装有接近200kg硅胶填料的柱子在使用一次后就扔掉的壮观景象。当然，重复使用的情况一般在物料纯度较高，色素很少的情况下才能实现。我们曾经尝试过装好的柱子(180kg填料)可以重复使用近12次，而且在使用的过程中，第一次的效果并不是最好的，从第二次开始到后来层析的效果比较稳定，效果也不错，然后是有一个缓慢下降的趋势，到最后不能使用却是突然性的。 如果物料纯度确实太差，那也没办法，只能将用过的硅胶拿去再生后重复使用了。 硅胶在使用过程中因吸附了介质中的水蒸汽或其他有机物质，吸附能力下降，可通过再生后重复使用。 一、硅胶吸附水蒸汽后的再生 硅胶吸附水份后，可通过热脱附方式将水份除去，加热的方式有多种，如电热炉、烟道余热加热及热风干燥等。 脱附加热的温度控制在120--180为宜，对于蓝胶指示剂、变色硅胶、DL型蓝色硅胶则控制在100--120为宜。各种工业硅胶再生时的最高温度不应超过以下限度： 粗孔硅胶不得高于600； 细孔硅胶不得高于200； 蓝胶指标剂（或变色硅胶）不得高于120； 硅铝胶不得高于350。 再生后的硅胶，其水份一般控制在2%以下即可重新投入使用。 二、硅胶吸附有机杂质后的再生 焙烧法 对于粗孔硅胶，可放在焙烧炉内逐渐升温至500--600，约经6—8小时至胶粒呈白色或黄褐色即可。对细孔硅胶，焙烧温度不能超过200。 漂洗法 将硅胶在饱和水蒸汽中吸附达到饱和后放热水中浸泡漂洗，并可结合使用洗涤剂以除去废油或其它有机杂质，再经净水洗涤后烘干脱水。 溶剂冲洗法 根据硅胶吸附有机物种类，选用适当的溶剂将吸附在硅胶内的有机物溶出，然后将硅胶加热以脱除溶剂。 三、硅胶再生应注意的问题 烘干再生时应注意掌握逐渐提高温度，以免剧烈干燥引起胶粒炸裂，降低回收率。 对硅胶焙烧再生时，温度过高会引起硅胶孔结构的变化而明显降低其吸附效果，影响使用价值。对于蓝胶指示剂或变色硅胶，脱附再生的温度应不超过120，否则会因显色剂逐步氧化而失去显色作用。 ⒊ 经再生后的硅胶一般应过筛除去微细颗粒，以使颗粒均匀。正相、反相和极性胶联柱使用手册