MTT比色法化疗药敏试验指导选择恶性肿瘤化疗方案.pptVIP

本文观看结束！！！ 祝各位身体健康！万事如意！！ * * 经MTT比色法化疗药敏试验指导选择化疗方案后疗效明显提高，有效率比经验化疗可提高近30%。 * * * * 谢 谢 欣 赏！ 东平县第一人民医院 孟春平 * * 化疗在恶性肿瘤治疗中的地位已经确立，但由于肿瘤的异质性，不同的肿瘤类型或同一肿瘤类型的不同病人，甚至同一病人不同的疾病阶段，化疗效果差别很大。 如能建立一种像细菌药物敏感试验一样相对可靠的肿瘤化疗药物敏感试验方法来选择化疗药物，可以指导化疗药物选择，提高疗效。 * * 肿瘤化疗药敏试验必须应尽可能满足以下几个条件： ①药敏试验的结果能预测临床疗效； ②药敏试验的肿瘤组织能代表临床个例肿瘤的特性； ③根据药敏试验化疗，能提高病人的生存率。 * * 常用的方法： 克隆形成试验 肾包膜下移植法 三磷酸腺苷生物发光法 3H胸腺嘧啶核苷掺入法 差别染色细胞毒检测 MTT比色法 * * 因肿瘤化疗药敏试验对实验室建设、设备配备、人员培养等要求较高，目前多在大型医院或研究院所开展，在我院开展之前，未见其他县级医院开展的报道。 * * * * 肿瘤细胞线粒体膜呼吸链上广泛存在琥珀酸脱氢酶，参与细胞氧化供能等重要生理及生化过程，是细胞拥有代谢活性的重要特征。 琥珀酸脱氢酶能把二甲基噻唑二苯基四溴唑盐（MTT）还原成蓝色的不溶于水的甲臜（Formazan），后者的生成量与药物处理后的细胞相对数目和/或细胞相对活性成正相关。 * * 用二甲基亚砜（DMSO）与之混合并充分溶解，用酶标仪检测其或吸光度值（A值）的变化，就能定量地反映药物、放射等因素处理后细胞相对数目和/或细胞相对活性的变化。 * * 不同浓度化疗药物对肿瘤活性抑制能力不同。 对肿瘤细胞达到最大抑制作用50%时所需要的化疗药物浓度被称为IC50，是肿瘤药敏试验中通用的观测指标。 获取相关观测值如药物浓度、肿瘤抑制率后可以通过SPSS统计软件 Regression-Probit 模块计算。 * * * * 从手术切除或活检取到的无菌标本中取新鲜肿瘤组织，放入无菌平皿，去除血块和坏死组织，无菌PBS冲洗多次直至无血迹，根据实际情况用无菌小型刀剪从肿瘤组织切下外层癌块或直接切取，放于另一无菌平皿中，并剪成1-2mm小块，放入有磁力搅拌棒的玻璃烧瓶中。 * * 加入消化液（0.5% trypsin+0.04 EDTA）覆盖组织块，将烧瓶放在磁力搅拌器上缓慢搅拌15分钟，多次重复，直到细胞组织块完全消化，收集消化液，离心3000rpm、15分钟，弃上清液，用含血清培养基悬浮沉淀，计数细胞，制备5×105/ml细胞悬液，接种到培养瓶，反复贴壁法纯化，必要时建系。 * * 每种待测化疗药物使用一个96孔培养板，设6个、跨度10000倍的不同浓度的药物溶液，每个培养条件重复3个孔，每孔约10000个肿瘤细胞。 另外设6个孔为不加药的肿瘤细胞对照组，和6个孔为无细胞的空白对照组，孵育24-96小时。 * * 每孔加入MTT（浓度5mg/ml）20μl，继续培育1-8小时，平板离心机离心3000rpm、15分钟，吸去各孔的培养液，加入DMSO 200μl。将培养板振荡5分钟后，在酶标仪上吸收波长570nm的条件下，测定各孔A值。 * * * * 采用SPSS统计软件 Regression-Probit模块，将不同跨度的药物浓度作对数转换，设定为协变量，将相对应的细胞相对存活率设定为响应频率，观测值汇总设定为100%，计算出该化疗药物的IC50，并与参考值相比较判断化疗药物是否敏感。 * * * * 北京军事医学科学院307医院乳癌内科根据MTT药敏实验选择化疗药物治疗73例晚期乳腺癌患者，有效率为76.6%（56/73），经验对照化疗组为43.8%（32/73），经分析有统计学差异；而MTT药敏试验显示为耐药的10例患者给予经验化疗，无1例有效；证明MTT药敏试验结果与临床疗效高度一致。 * * 因MTT比色法瘤敏试验需经过肿瘤病理组织的采集、原代细胞培养、建系、MTT比色等多步骤操作，县级医院缺乏相关的人员及设备，鲜有开展。我院从建立细胞培养室以来，已开展MTT比色法瘤敏试验的30余例，能够客观评价疗效者有24例，根据RECIST标准评价为有效者17例，有效率达70.9%，远高于经验化疗的41.7%。 * * * *