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3.3 微藻大规模高密度培养技术 微藻生物量产量和生长速度的测量 藻体细胞计数：血球计数板计数 吸光度值：最适波长；藻细胞密度与吸光度值的关系曲线 生物量干重的测量：方法：取10ml培养液在4.5*103r/min的转速下离心15min后弃上清液，以PH=4的酸化水洗2遍后用PallA/B膜过滤，于105℃ 烘至恒重后以精密分析天平称量。 藻体生长速度的测量： 比生长速率（1/d）：  三个关键因素 如何高效率地捕获和利用光能 如何高效率地吸收和利用营养 如何优化微藻的培养工艺条件 如何高效率地捕获和利用光能 光照和微藻的生长 光反应 暗反应 光抑制 光衰减 光反应包括光能的吸收、传递和转换等过程。其最终电子供体是（H2O ），最终受体是（NADP+ ）。反应结果产生了固定和还原CO2所需的（ 能量ATP ）和（还原力NADPH), 即光合同化力，同时产生（O2）。 暗反应实质上是一个酶化学反应过程，这一过程主要受CO2浓度、温度和其他有关培养条件的影响和调控，是固定（CO2）的具体过程，其基本转化途径就是（ 磷酸戊糖还原途径或称卡尔文途径）。在一次循环中，必须动用光反应中合成的（ 12）分子NADPH和（18）分子ATP. 光衰减现象 定义：当光辐射通过培养液时，随着光子的被吸收、反射和散射等而造成的光子通量密度（Photon flux density,PFD）减少的现象。 公式： I0:入射光的PFD，Ir:穿透光的PFD，X:细胞密度，L:光径，a:指定条件下样品的光吸收(衰减)系数 如何高效率地吸收和利用营养 海水VS人工海水有机肥料VS无机配方 最主要因素：N、P、维生素研究内容：来源；N/P；优化配方 碳源：HCO3-盐更经济； 常与CO2结合使用 如何优化微藻的培养工艺条件 实验设计作业1 一种经济饵料微藻的大规模高密度培养的研究只设计简要的实验路线； 不包括具体方法及其他细节； 研究目的 遵照：实验室技术开发→过程工程研究→工厂生产实践的科技成果产生转化规律，采用：摇瓶优化→放大培养→光生物反应器高密度培养的研究路线，使藻细胞密度和生物量产量分别达到了8.1?107/ml和1.13g/L，最终实现纤细角毛藻的高密度大规模培养 。 研究内容 1 纤细角毛藻摇瓶培养优化 2 纤细角毛藻放大培养 3 纤细角毛藻光生物反应器培养 2 摇瓶培养优化 目的： 优化培养基，摸索培养条件。 方法： 在光强，温度等其它培养条件固定的情况下，通过正交实验的方法针对影响角毛藻生长的主要营养因素进行培养基优化，实验采用300ml三角瓶在光照培养箱中进行。 因素水平表 2.1 正交实验 培养基优化正交试验结果 2.2 培养条件的影响 目的： 考察接种量 、pH值等培养条件对纤细角毛藻生长影响。 方法： 300mL三角瓶（150mL培养基）在ZPG-350型智能光照培养箱中进行，光照4?103lx，光暗时间比为14:10, 温度为23℃，每天摇瓶3次。 实验结果 接种量在1%~5%时，藻细胞的延迟期也较长，细胞生长缓慢；而接种量在10%~12.5%之间时，细胞的延迟期较短，最终培养密度也较高，从生产实际考虑接种量取7.5%比较合适 。 纤细角毛藻细胞在pH7.8~8.6范围内生长良好。 培养纤细角毛藻时，必须对海水进行严格灭菌 操作以防止污染。 3.1 不同碳源和流加营养的影响 1 CO2唯一碳源的影响 2 NaHCO3唯一碳源的影响 3 混合碳源时的影响 4 流加营养的影响 实验结果 采用先以NaHCO3为碳源，培养中期再往瓶中通入适量的CO2控制pH值稳定的混合碳源培养方法时纤细角毛藻的培养效果最好。 微生物培养优化中常用的流加营养的方法也能地有效提高该藻的生长速率和生物量产量。 4 纤细角毛藻的光生物反应器高密度培养 目的： 实现纤细角毛藻在光生物反应器中的高密度培养 方法： 在PhR—L20C气升内环流光生物反应器采用正交实验针对光照强度、培养温度、通气率等因素进行培养条件优化。 PhR--L20C光生物反应 4.1 反应器正交实验 实验结果 光照强度对纤细角毛藻生长速率的影响高度显著，通气率的影响显著。 纤细角毛藻在反应器中的优化培养条件为：光强8mW/cm2﹑、通气量0.6vvm、培养温度23℃。 4.2 纤细角毛藻的优化条件培养 目的： 检验前阶段工作的优化效果，实现纤细角毛藻在反应器中的高密度培养 方法：