慢性EAE模型C57BL%2f6小鼠EBI3mRNA与P28mRNA表达分析.pdfVIP

摘要 单位EBl3mRNA和P28 动态表达变化，探讨其在EAE发病机制中的作用。 方法72只近交系无特定病原体(SPF)级8-10周健康雌性 C57BL／6J小鼠，体重18-22克，随机分为空白对照组、佐剂组和模 型组。模型组中发病小鼠又分为发病前、发病初、发病高峰和慢性 期组。用人工合成的MOG35—55和自制的完全弗氏佐剂免疫C57BL／6J 小鼠制成慢性EAE动物模型，每只小鼠注射0．2ml，其中含人工合成 周后用同样剂量加强免疫一次；免疫当天和48小时后每只小鼠经尾 静脉注射百日咳毒素0．5mg。免疫当天定为第0天起至第32天实验 终止前，每天8AM一8PM观察动物行为活动，采用盲法，每天2人至 少一次在同一时间称体重并按Benson评分标准做EAE严重性的临床 评估，模型的成功与否主要根据Benson评分标准判定和病理学检查， 结合MRI结果综合评价；RT—PCR技术观察空白对照组、佐剂对照组 和模型组发病前、发病初、发病高峰和慢性期组脑和脊髓EBl3mRNA 和P28mRNA的表达变化。 结果 1．动物模型 慢性EAE模型累计成功率为83．3％，死亡率为8．3％，模型组 20天发病，20-24天达高峰，28—32天缓解， 轻；空白对照组和佐剂对照组体重呈增加趋势， 分。发病小鼠脏和Well氏髓鞘染色示小血管 髓鞘脱失；1-5T头部和脊髓扫描发现，EAE组 病变在MRI冠状切面，横断面T2加权像及水抑制像可见多个散在长 T2高信号，但在T1加权像及脊髓信号不易辨认。 2．RT—PCR 分别计算EBl3的光密度值／B—actin的光密度值比值和P28的光密 度值／B-actin的光密度值比值。 ‘ mRNA和P28mRNA的表达与佐剂 空白对照组小鼠脑和脊髓EBl3 mRNA和P28mRNA的表达相比差异无统计 对照组小鼠脑和脊髓EBl3 学意义(P0．05)。 2．1P28 mRNA的表达变化： mRNA表达。MOG35—55 对照组小鼠脑和脊髓仅有低水平的P28 免疫C57BL／6小鼠诱导的慢性EAE模型小鼠在发病初即可见CNS中 P28 mRNA表达升高，并且一直持续至发病高峰期与慢性期；而且， 与发病初期比，发病高峰期、慢性期P28mRNA的表达水平较高(与 对照组相比均有统计学意义，PO．01)。 2．2EBl3 mRNA的表达变化： 对照组小鼠脑和脊髓仅有少量EBl3mRNA表达。MOG35—55免疫 mRNA表达升高(与相比均有统计学意义，PO．01)；发病高峰时表达 lI 达高峰(A3与对照组相比有统计学意义，PO．01)，慢性期时开始下 降但仍持续高于对照组(A4与对照组相比有统计学意义PO．Ol和 PO．01)水平。 结论： 有发病率高，可靠的特点，可作为研究MS的理想动物模型。 2．IL一27有可能在早期促进EAE发病并参与慢性阶段的炎症反 应。 关键词实验变态反应性脑脊髓炎模型，IL-27，EBl3，P28 Ill ABSTRACT To the objective ofEBl3mRNAandP28 investigate changes mRNA in of brainand cordinducedchronic expression spinal mode