手性分析条件的建立和优化——手性分析中的注意事项.pptVIP

内容提纲 1. 手性HPLC分析条件的建立和优化 1-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 Daicel手性色谱柱一览表 分析条件优化流程图 (1) 添加物在分离中的作用 添加物的种类和用量 分析条件优化流程图 (2) 分析条件优化流程图 （3） 筛选结果 分析条件优化流程图 （4-A） 醇浓度的影响 分析条件优化流程图 （4-B） 温度的影响 分析条件优化流程图 （4-C） 醇种类的影响 正相柱分析条件优化的总结 根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物 调整正己烷/醇的比例，从而选择适当的保留时间 其它优化方法 流动相的醇浓度 降低醇的浓度虽改善分离度，但会延长分析时间 色谱柱温度 升高柱温虽可使峰形锋利，但α值会降低 流动相中醇的种类 改换醇的种类(IPA?EtOH)，有时可使分离发生一些变化 内容提纲 1. 手性色谱柱分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的有关注意事项 RH系列（反相用）的规格 根据样品性质选择流动相 反相流动相的pH值对分离度的影响(AS-RH) 有机溶剂种类对分离的影响 反相柱分析条件优化的总结 根据样品性质选择流动相 ※中性，酸性样品对4种反相柱可使用相同的流动相。但是，碱性样品对OD-RH、OJ-RH组和AD-RH、AS-RH使用的流动相是不同的。 探索适当的保留时间和流动相组成 其它优化条件 水溶液和有机溶液比例 多数情况下降低有机溶液的浓度可改善分离性能，但将延长分析时间。　　 色谱柱温度 升高色谱柱温度会使峰形变得锋利，但会降低α值。 有机溶剂的种类 有机溶剂的种类不同，其洗脱强度也不同。有时其分离效果也发生一些变化 内容提纲 1. 手性色谱柱分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 手性色谱柱组合筛选 为何选用AD-H,AS-H,OD-H,OJ-H这4种柱子？ 为何选用15cm长度手性色谱柱呢？ 组合筛选设备 串联旋光检测器的好处 组合筛选设备的程序编制 筛选结果示例　 　　　　　　　　 信息１: 判别具有分离可能性的色谱柱 信息2: 色谱柱和洗脱顺序 信息3: 醇的种类对分离的影响 分析条件的选择 样品制备时??? 若筛选没得到理想的分析条件时 应用组合筛选设备探索分析条件总结 使用具有广普分离能力的的4种手性色谱柱 使用适合高流速的15cm的手性色谱柱 组合应用2种醇，考察其分离情况 和旋光检测器并用，可一次性获得更多的判断信息 内容提纲 1. 手性HPLC分析条件的建立和优化 2-1 正相色谱 2-2 反相色谱 2. 手性色谱柱的自动筛选 3. 手性分析中的注意事项 样品： AD-H vs OD-H、OJ-H的洗脱顺序相反 OD-H和OJ-H，用每种流动相均可分离。 AD-H，只有用乙醇才可分离。 选择条件的要点 洗脱时间 峰形 对映体的洗脱顺序 选择条件的要点 样品的溶解度 洗脱顺序 选择最接近基线分离的条件 调整流动相中醇的比例 调整流速 调整温度 变更为同种类长度为25cm的色谱柱。 尝试其他的色谱柱 Daicel大部分手性柱是涂敷型产品，在市场上具有着独特性。 若导入错误的溶剂，涂敷型柱子便会马上被破坏掉。 当导入错误的溶剂时，柱压会出现明显上升。 当用户出现柱压剧增或分离突然变差时，最常见的原因是错误地使用了溶剂。 一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。 若您遇到此类分析故障时，请对出厂报告重新确认柱子的性能或与大赛璐联系 最常见的使用故障=溶剂错误 将手性柱接入液相色谱仪之前 1.用异丙醇将HPLC所有管路彻底清洗。 2.用流动相将HPLC所有管路彻底清洗。 所有溶剂入口 泵 泵与进样阀之间 定量环 进样阀清洗液 进样阀与柱子之间 柱子与检测器之间 检测器 使用前彻底清洗管路 流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。 样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。 流速过快，会引起柱压升高 每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的《色谱柱说明书》。 彻底过滤流动相及样品溶液。 样品预处理 使用保护柱 合理调节流速，特别在把柱子刚接上仪器的时候 原因： 后果： 长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。 方法： 压力 mg/L mg/L 流动相中水含量的影响 mg/L 流动相中水含量的影响 CHIRALCEL OJ 正己烷/乙醇＝90/10 1.0 ml/min，27