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葡激酶与重组葡激酶 葡激酶(staphylokina~e．sak)是由某些金黄色葡萄球菌菌株产生的具有活化纤溶酶原作用的蛋白质。 早在本世纪四十年代末Lack首先从金黄色葡萄球菌中发现了Sak，五十年代至六十年代就对Sak的纤溶作用进 行了体外研究，并在狗的体内评估其溶栓作用，结果发 现Sak可导致出血以及毒副作用较大，因而对其研究曾 一度沉寂。’近十几年来，国外对Sak的研究仍然方兴未 艾．取得了很大进展。 有研究从金黄色葡萄球菌mc基因组克隆出sak基因并确定了其序列。Sak结构基因长489bp，从ATG开始的5’端有27个氨基酸的信号肽序列，起始密码ATG上游7bp处为sD序列(GGAGGG)，上游100bp处富含A—T序列，该区域可能起促进转录作用。终止于序列富含GC，位于终止密码TAA下游300～500bp间。在结构基因的编码区内有一HacⅢ和两相邻近的sau3A位点。 Sak基因编码163个氨基酸残基，由单链多肽构成，其N末端27个氨基酸的信号肽在分泌中被去除，故成熟的Sak由136个氨基酸组成，分子内无二硫键，不含胱氨酸。赖氨酸较多占18.7 %，其次是脯氨酸10.8 %，苏氨馥10.7%．缬氨馥10.4 %，主要为疏水性氨基酸。 研究表明，Sak肽链11位上的赖氨酸和26位上的甲硫氨酸残基是激活纤溶酶原的重要部位，若将其水解或用其它某些氨基酸替代，Sak将失去活性。 Sak的二级结构为螺旋状，整个分于由2个大小类似的折叠区域组成，这二部分重心的平均趴离为3.7nm，在溶液中二者相互位置是可变的，象一柔软的易弯曲的哑铃。其旋动半径为2.3nm，斯托克斯半径2.12nm，最大维10nm，沉降系数1.71S。分子中约18％的氨基酸参与螺旋结构，30％氨基酸参与β片状结构，20％的氨基酸构成β转角。 Sak 的稳定性好，Sak 溶液加热至100℃，15min仍保持76 %的活性，在pH2.0或11.2溶液中放置24h仍有活性，pH中性环境可稳定5天，Sak在体内的半衰期比t-PA长，注射Sak后，在血浆初始半衰期为6.3土0.6min，终末半衰期为 37土15min。 Sak并不是一种酶，它的活性指对纤溶酶原的激活效力而言．体外实验表明，随着SAK最度上升，激活纤溶酶原速度加快，但Sak的浓度过高时，其活性不再升高反而下降，如Sak浓度一定，增加纤溶酶原浓度其活性也增加。SAK的最大激活温度为37℃～45℃。无明显种族特异性，对人、拂拂、猴、竟、狗、猪和豚鼠等的纤溶酶原都有激活作用，但对牛的纤溶酶原无作用。Sak对纤溶系统的影响不同种属间稍有差异，溶血栓效力也存在差别。 纤维蛋白可增强SAK的活性．在纤溶酶原与Sak的体系中，如缺乏纤维蛋白(FCB-2)则对纤溶酶原的激活速度减慢，加入FCB-2可使Sak的活性提高20倍，选种特性与t-PA相似。 动物体内外溶血栓实验表明Sak对纤维蛋白呈高度特异性，它只激活血栓表面上的纤溶酶原，而对系统性纤溶作用无激活作用，对循环中的轩维蛋白厚无降解作用。 Erikssion等首先提出Sak激活纤溶酶原的机制与链激酶（SK）相同。Sak与纤溶酶原按1：1的分子比例形成葡激酶-纤溶酶原复合物，导致纤溶酶原话性部位暴露，纤溶酶原由单链变为双链的纤港酶，形成活性葡激酶-纤溶酶复合物．后者再激活纤溶酶原分子。 他们通过电泳证明复合物的存在。如果用活性位点滴定剂NPGB(P-硝基苯-P1胍基苯甲酸)掩盖纤溶酶原上的活性位点。则不能形成有活性的葡激酶-纤溶酶复合物。 研究表明，纤溶酶原抑制剂α?-抗纤溶酶能与纤溶酶分子中的赖氨酸结合位点结合，使复合物中的纤溶酶失活、Sak从复合物中解离，从而抑制葡激酶-纤溶酶原的激活。 而在血栓局部，纤维蛋白对葡激酶-纤溶酶的形成起易化作用，同时纤维蛋白能与α?-抗纤溶酶竞争赖氨酸结合位点，从而解除α?-抗纤溶酶的抑制，即使活性复合物被α?-抗纤溶酶中和，解离的Sak也可与纤溶酶原再次结合而被循环利用，使其溶栓效能增大，故在纤维蛋白(血栓)表面，α?-抗纤溶酶对葡激酶-纤溶酶的中和速度可减慢l00多倍。 当血浆中无纤维蛋白存在或血栓被消化以后，纤维蛋白对该复合物的保护作用消失，即使有少量的活性复合物形成，也迅速被α?-抗纤溶酶中和，Sak被释放，纤溶酶原的活化也就终止。 除α?-抗纤溶酶外，另一些蛋白酶抑制剂如α?-巨球蛋白、α?-抗胰蛋白酶等也抑制葡激酶对纤维蛋白原的激活，同样当存在纤维蛋白时，这种抑制作用消失。 目前已从不同嗜菌体及溶源性金葡菌基因组中克隆出三种自然变异的Sak基因，这三种基因编码区中仅有4个核苷酸不同，其中1个不引起氨