黄芩苷酶的制备及理化性质的研究.docVIP

黄芩苷酶的制备及其理化性质研究 任慧霞 张 敏 山东大学药学院 生化与生物技术药物研究所（济南 250012） 摘 要：目的 研究黄芩苷酶的制备及其理化性质。方法 采用提取、透析、sephadex G150 凝胶柱层析及冷冻干燥的方法获得黄芩苷酶；利用Linewear-Burk作图法求得该酶对黄芩苷的Km值，研究了pH值、温度、离子强度、底物浓度等对黄芩苷酶活力的影响。结果 该酶对黄芩苷的Km值为 57.4mmol/L，最适pH值为5.8，温度为45℃，不同离子的影响、分子量 ，底物浓度及产物对该酶活性基本无影响，反应初速度随酶浓度的增加而增加并呈现良好的线性关系。结论 获得活性较高理化性质较稳定的一种黄芩苷酶。 关键词：黄芩苷；糖苷酶；理化性质关于 Preparation and Characterization about flavonoids Glycosidase REN Hui-xia ZHANG Min, Institue of Biochemical and Biotechnological Drug, School of Pharmaceutical Science, Shandong University, Jinan 250012 Abstract：Purpose To measure the Km of this flavonoids Glycosidase from Scutellaria baicalensis Georgi with baicalin，study the effect of pH , temperature, ionic strength and subst rate concent ration on enzyme activity, and the linear relation of enzyme concentration.Methods Using means of collection and dislysis,sephadex G 150 column chromatography to prepare crude enzyme.Measuring Km by Linewear-Burk graphic method, calculate the enzyme activity by measuring the absorbance of baicalein at 450nm with ultraviolet spectrophotometry. Results The Km with baicalein is 57.4mmol/L,its optimum pH , temperature, ionic strength and subst rate concent ration is 5.8, 45℃, 1mol/L，40mmol/L，respectively. Conclusion The physico-chemical property of this new flavonoids Glycosidase from Scutellaria baicalensis Georgi was studied. Key words: Glycosidase; Characterization； 　 糖苷酶是指一类以内切或外切方式水解各种含糖化合物(包括单糖苷、寡糖、多糖、皂甙、糖蛋白等) 中的糖苷键,生成单糖、寡糖或糖复合物的酶，它是维持生物体基本功能的重要酶类之一,在自然界广有分布,几乎各种类型的动、植物和微生物中,都有糖苷酶存在[1，2]。常根据其降解的底物对其命名，,如水解β-D-葡萄糖苷键的酶称为β-D-葡萄糖苷酶，水解甘露糖苷键的酶称为甘露糖苷酶。 本实验室研究的主要是能将黄芩中黄芩苷降解为黄芩素的一类糖苷酶，故称之为黄芩黄苷酶。 　黄芩为唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的干燥根。在临床中属常用中药，用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染、菌痢、肝炎、高血压等[3]。　黄芩苷(baicalin) 是黄芩中主要的有效成分之一,属葡萄糖醛酸苷类,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸,具有清热解毒、抗炎、利胆、降压、利尿、抗变态反应等多方面的作用[4]。 本文主要对其理化性质进行了初步的研究，测定了其动力学常数Km值，考查了pH值、温度、离子强度、底物浓度对酶活力的影响，以及酶浓度的线性关系。 材料与方法 1.1 材料 酶提取植物原料，实验室购得；黄芩苷标准品，实验室自制；黄芩素标准品，实验室自制；透析袋，；sephadex G 150，SIGMA公司；其他试剂均为国产分析纯。 AKTA explorer 快