高效液相色谱法测定胸腺肽α1的氨基酸组成.docVIP

高效液相色谱法测定胸腺肽α1的氨基酸组成 初虹 徐龙芳 盛伟红 余婧岚 （苏州中科天马肽工程中心有限公司 苏州 215101） 摘要 目的： 建立高效液相色谱法测定胸腺肽α1的氨基酸组成。方法： 采用OPA试剂柱前衍生法测定氨基酸组成。色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse AAA(4.6*150mm,3.5μm)，流动相：A相为40mmol/L磷酸氢二钠的水溶液，pH7.2, B相为甲醇∶乙腈∶水＝45∶45∶10，采用梯度洗脱，流动相B在17min内从0％升至57％；流速：2.0ml·min-1；检测波长：338nm。 结果：高效液相色谱法测定各氨基酸的线性范围为0.1～5μmol/ml，r=0.999，本方法重复性和精密度良好（RSD2％）。结论：高效液相色谱法测定胸腺肽α1的氨基酸组成，方法简便，结果准确。 关键词 胸腺肽α1 氨基酸 高效液相色谱法 OPA试剂 衍生 Determination of Amino acid Composition of Thymosin α1 by HPLC CHU Hong, XU Long-fang, SHENG Wei-hong, YU Jing-lan (Chinatech Peptide Co., LTD. SUZHOU 215101) Abstract Objective: To establish HPLC method for determination of Amino acid Composition of the Thymosin α1. Method：OPA-reagent pre-column derivatization method was used. column: Agilent ZORBAX Eclipse AAA(4.6*150mm,3.5μm);mobile phase A: 40mmol/L Na2HPO4,pH7.2;mobile phase B:CH3OH∶CH3CN∶H2O=45∶45∶10,the gradient elution method was used that the mobile phase B was increased from 0％ to 57％ in seventeen minutes; flow rate:2.0ml·min-1;detector wavelength:338nm. Results: There is a good linear relationship with every amino acid with the range of 0.1～5μmol/ml (r=0.999),the repeatability and precision of the method is good(RSD2％). Conclusion: The method to determine amino acid composition of Thymosin α1 by HPLC is simple and accurate. Key words Thymosin α1, Amino acid , HPLC，OPA-reagent, derivatization 胸腺肽α1（thymosin 1,Tα1）是胸腺产生的一种蛋白质和多肽激素，能刺激T淋巴细胞的成熟。1966年，由Goldstein等[1]最早从牛胸腺组织TF5中分离出来，是一种具有热稳定性的酸性多肽，比原来TF5制备的生物活性高10～1000倍[2]。由于大多数氨基酸在紫外区没有吸收，我们采用柱前衍生，使其在紫外区有吸收，之后采用HPLC对其氨基酸组成的分析方法进行了研究。 1 仪器与试药 Agilent 1200 HPLC(G1322A Degasser; G1311A Quat Pump; G1329A ALS; G1316A TCC; G1314B VWD) (安捷伦公司)；Agilent Chemstation B 03.01色谱工作站（安捷伦公司）；甲醇，乙腈均为色谱级（美国Tedia公司）；丙氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、丝氨酸、谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸（上海康捷科技发展有限公司）；正缬氨酸（安捷伦公司）；其余试剂均为分析纯；胸腺肽α1（批号：080101、080102、080103，本公司自制）。 2 色谱条件和系统适用性试验 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse AAA(4.6*150mm,3.5μm)。流动相：A相为40mmol/L磷酸氢二钠的水溶液，pH7.2； B相为甲醇∶乙腈∶水＝45∶45∶10，采用梯度洗脱，流动相B在17min内从0％升至57％。流速：2.0ml·mi