百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立.pdfVIP

第 33卷第 3期 上 海 交 通 大 学 学报 (农 业 科 学版) Vo1．33No．3 2015年 6月 JOURNAL0FSHANGHAIJIA0T0NGUNIVERSITY (AGRICULTURALSCIENCE) Jun．2015 文章编号 ：1671-9964(2015)03—0043—10 D0I：10．3969／J．ISSN．1671—9964．2015．03．007 百子莲茎尖分生组织蛋 白双向电泳体系的建立 张 洁 ，孙一凡 ，张 获 ，申晓辉 (1．上海交通大学 农业与生物学院，上海 200240；2．上海交通大学 生命科学技术学院，上海 2OO24O) 摘 要 ：以 蓝‘色大花 ’百子莲 (Agapanthuspraecoxssp．orientalisB‘igblue’)茎尖分生组织为材 料，对比研究了不 同提取与裂解方法制备蛋 白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋 白双向电泳体 系(Two—dimensionalgelelectrophoresis，2一DE)的干扰。提取过程采用 TCA／丙酮沉淀法和超声 波破碎法；蛋 白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟(PhenylmethanesulfonylFluoride，PMSF)和 乙 二胺四乙酸 (EthyleneDiamineTetraaceticAcid，EDTA)、Cocktail(广谱性)蛋 白酶抑制剂、核酸酶 NucleaseMix和2一DClean-Up蛋 白纯化试剂盒。制备的各蛋白样品经过 7emIPG (pH 3～1O)胶 条上样、电泳后发现，使用 TCA／丙酮沉淀法提取蛋 白，裂解液中加入 Cocktail蛋白酶抑制剂裂解 后 ，用 2一DClean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶 电泳 图谱效果最好 ，获得蛋白点数量最多，且 蛋 白等电点pI主要分布于4～8之间。随后，应用分辨率更高的24emIPG(pH4～7)胶条进行电 泳效果的验证 ，蛋 白点在凝胶 的2个方向上均得到 了较好地分离，经过 ImageMaster2一DPlatinum 5．O软件分析后共检测到有效蛋 白点820个。本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝 胶 电泳体系，为后续开展百子莲属植物蛋 白质组学研究提供 了重要的技术保障。 关键词：百子莲；茎尖分生组织；蛋 白提取；蛋 白酶抑制剂；双向凝胶 电泳 中图分类号：S682．32 文献标识码 ：A EstablishmentofProteinTwo—DimensionalEIeCtrOphOreSiSSystem of AgapanthusPmecox Stem TipMeristem ZHANGJie，SUNYi一知 ，ZHANGDi，SHEN Xiao—hui (1．SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China 2．SchoolofLifeScienceandBiotechnology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China) Abstract：The stem tip meristem has vigorous division ability，and contains abundant polyphenol， polysaccharideand nucleic acid substanceswhich can strongly interfere for protein two—dimensional electrophoresissystem (2一DE)．Inthisstudy，thedifferentprotein extractionandpyrolysismethodswere usedforeliminatingtheseinterferences，andtoestablishthestem tipmeristem 2-DE system inAgapanth