《环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测创伤弧菌检测方法的建立》.pdfVIP

生物技术通报 · 技 术 与方 法 · BloTECHNoLoGY BULLETIN 2014：／ggig61f／1 环介导等温扩增联合横向流动试纸条快速检测创伤弧菌 检测方法的建立 王耀焕 王瑞娜 周前进 陈炯 (宁波大学生物化学与分子生物学实验室，宁波 315211) 摘 要 ：环介导等温扩增技术 (LAMP)与横 向流动试纸条 (LFD)检测联合应用，建立了一种新的快速 、便捷的创伤弧茵 检测方法。针对创伤弧茵的外膜蛋白TolC基 因设计 6条特异性引物和 1条异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的探针。生物素标记 的 LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交，杂交产物经LFD检测。优化后的扩增温度和时间为63℃反应 35min，加 上细菌基因组DNA提取步骤，完成检测仅需要80min。LAMP—LFD方法可特异性地检出创伤弧菌，对哈维氏弧茵等 9种水产品常 见病原茵的检测均呈阴性 ；