第五章DNA重组-精.pptVIP

第五章 DNA重组 同源重组Homologous recombination 位点专一性重组Site-specific recombination 转座重组Transposition 生物进化需要可遗传的变异不断产生,变化的根本原因是突变,但就每个个体而言发生突变的几率毕竟很低。涉及到的基因数目非常有限，如果只有突变而没有不同个体间的基因交流，则生物体难以迅速组装产生最能适应环境条件的基因组合。 而且，通过不同个体间的基因交换，可以保证遗传的多样性，从而为选择奠定物质基础。 第一节 同源重组Homologous recombination  同源重组指由两条同源区的DNA分子，通过配对、链断裂和再连接，而产生的片段间交换的过程。 真核生物非姐妹染色单体之间的交换，姐妹染色单体的交换，细菌及某些低等真核生物的转化，细菌的转导、接合、噬菌体的重组都属于这一类型。其中，E.coli等细菌的同源重组又称为依赖RecA的重组。 真核生物同源重组也称交换（crossing over），是指减数分裂（meiosis）过程中染色体间遗传物质的交换。 其特征是发生在同源DNA序列之间。重组酶能以两个DNA分子中任何一对同源序列作底物进行交换。 特征 涉及同源序列间的联会配对，且交换的片段较大 涉及DNA分子在特定的交换位点发生断裂和错接的生化过程异源双链区的生成 存在重组热点 需要重组酶 单链DNA分子或单链DNA末端是交换发生的重要信号 一、同源重组的分子模型 1、断裂-复合 Breakage and reunion 2、异源双链在重组位点上，每个双链都有一个由两个亲本DNA分子中的一股单链共同组成的双链区域，这段区域称为异源双链DNA（heteroduplex DNA） 3、分支迁移两个双螺旋形成的交叉连接很容易以拉链式效应扩散，也就是链交换可沿着双链滑动，这个过程称为分支迁移（branch migration） 4、Holliday结构 重组中连接两个DNA双链的交换中间物含有4股DNA链，在其连接处为了转换配对所形成交叉链的连接点称为Holliday结构。 5、连接分子的拆分 链交换形成的连接分子必须拆分（resolution），彼此分离为双链DNA分子。由于交联在一起的两条双链DNA分子实际上处在不断地异构化中，切口可能在两对同源链中任意一对上发生。 根据链裂断切开的方式不同，得到的重组产物也不同。如果切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA，则称为拼接重组体（splice recombinant），此种重组又叫做交互重组（reciprocal recombination）。 但如果切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA，则称为片段重组体（patch recombinant）。 连接分子可以以两种交替方式进行拆分，两侧基因或是发生交互重组，或是无重组发生。 但无论哪种拆分方式都说明一个原则，即链交换后总会在两条DNA分子上留下一段异源双链区，但侧翼序列的重组未必与之同时发生。 不同生物体同源重组的具体过程虽有不同，但基本步骤大致相同。两DNA分子只要含有一段碱基序列大体类似的同源区，就可以发生重组。 二、细菌的基因转移与重组 细菌可以通过多种途径进行细胞间基因转移，并通过基因重组以适应随时改变的环境。细菌的基因转移主要有4种机制：接合（conjugation）、 转化（transformation）、 转导（transduction）、 细胞融合（cell fusion）。 1、细菌的接合作用 2、遗传转化 遗传转化（genetic transformation）是指细菌品系由于吸收了外源DNA（转化因子）而发生遗传性状的改变现象。 具有摄取周围环境中游离DNA分子能力的细菌细胞称为感受态细胞（competent cell）。 自然条件下感受态的形成需要10多种蛋白质参与，实验室常用高浓度的Ca2+处理使细菌形成感受态。 3、细菌的转导 转导（transduction）是通过噬菌体将细菌基因从供体转移到受体细胞的过程。 4、细菌的细胞融合 在有些细菌的种属中可发生由细胞质膜融合导致的基因转移和重组。 三、大肠杆菌重组的分子基础 在细菌重组反应中活性最为明显的是由大肠杆菌染色体上rec 基因和ruv 基因编码的一些酶。 其中，主要有Rec A 蛋白，Rec BCD酶，Ruv ABC酶等到。 1、Rec A 蛋白 Rec A蛋白是催化重组基本反应的酶。RecA有两个主要的功能：诱发SOS反应和促进DNA单链的同化（assimilation）。单链同化是一个分子的单链侵入到另一个分子的双螺旋上，通过取代双螺旋上的原始链而形成异源双