全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体单克隆抗体蛋白高效表达体系的建立及其功能性分析.pdfVIP

国匾焦瘥堂盘查!Q!i生!月筮!!鲞筮!翅!坐』!螋!!!!：!业：!Q!!：!!!：!!：盟!：§ ·403· ·基础研究· 全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体单克隆 抗体蛋白高效表达体系的建立及其功能性分析 石佳宁韩晓健 吕福莲毕冬梅金艾顺 【摘要】 目的建立高效表达全人源抗人肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体(TRAIL)一RI单克 隆抗体(TRl-404)蛋白体系，并评价TRl-404抗体蛋白功能特性。方法构建pcDNA3．4载体抗体质 粒，转染Expi293F7”细胞，表达抗体蛋白。收集细胞培养上清，使用ProteinA／G纯化抗体蛋白。利用双 抗体夹心和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体蛋白浓度及特异性。流式细胞分析检测TRl-404 二者联合作用对Hela细胞和HCTll6细胞生存和增殖的影响。AnnexinV／PI双染色检测Hela细胞和 HCTll6细胞凋亡。结果成功构建pcDNA3．4载体抗体质粒和建立Expi293F“细胞蛋白高效表达系 统。精制的TRl404抗体既与重组TRAIL．R1抗原特异性结合，也能与Hela和HCTll6细胞表面的 TRAIL—Rl结合。发现TRI-404联合TRAIL作用于Hela细胞，肿瘤细胞凋亡效果显著提高。而在 HCTll6细胞中，TRAIL与TRl-404的联合作用未见显著提高。结论成功建立抗体蛋白高效表达系 统。TRl．404抗体特异性与TRAIL．R1抗原结合。TRl．404抗体提高TRAIL诱导的Hela细胞凋亡作用。 本研究为TRAIL．R1靶向的抗肿瘤治疗研究提供新方法。 【关键词】 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体；肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体；单克隆抗体； 凋亡 Establishmentofa efficient ofanovolhumanmonoclonal high system antibody expression against SHI Ullnournecrosisfactor-related anditsfunctionMcharacteristics iigandreceptor apoptosis·inducing Sci— Medical Xiaojtan，LYuFulian，BIDongmei，JIN ofImmunology，Basic Jianing，HAN Aishun．Department ence MeScal College，舶r6inUniversity，Harb讥150081，China author：JIN CorrespondingAishun，Email：aishunjin@ems．hrbmu．edu．en Toestablishea efficient andto mAbtotumour 【Abstract】0bjectivehigh expressionsystem generate necrosis toevaluateitsfunctional factor(TNF)一related apoptosis—inducingligandreceptor—l(TRAIL)一