基于山梨醇多次同步化处理的恶性疟原虫体外培养同步化方法.pdfVIP

第22卷第2期 寄生虫与医学昆虫学报 V01．22，No．2 2015年6月 ActaParasit01．Med．Entom01．Sin Jun．，2015 doi：10．3969／j．issn．1005旬507．2015．02．001 基于山梨醇多次同步化处理的恶性疟原虫体 外培养同步化方法 姚 瑶 张连惠 席珏敏 郭 莉 李 月 王 恒4 (中国医学科学院基础医学研究所病原生物学系，北京100005) 摘要 为了获得恶性疟原虫红细胞内期不同生长阶段更加精准的组织材料，本研究探索一种简便易行并能 获得同步化程度很高的恶性疟原虫虫株的方法。该方法采用山梨醇多次连续同步化恶性疟原虫环状体，并 继续培养得到同步化程度高、窗口小、虫血率高的红细胞内期各期的恶性疟原虫虫株；室温条件下(17— 20℃)继续培养同步化至裂成熟殖体期的恶性疟原虫虫株，用孑L径1．2¨m的无菌滤膜过滤，收集裂殖子。 经同步化处理之后，恶性疟原虫在环期、早期滋养体期、晚期滋养体期和成熟裂殖体期的同步化程度分别 在90％、85％、85％和80％以上，同步化后各期恶性疟原虫虫血率可达10％一20％，各期虫株的生长周期 的窗口可达4h以内。 关键词恶性疟原虫；山梨醇；同步化 疟疾是由疟原虫引起的危害最严重的寄生虫 育过程中，恶性疟原虫的生长代谢非常活跃，并 病，据据2014年WHO疟疾报告报道，全世界 且与宿主之间在不同发育阶段表现出不同的分子 仍有99个国家和地区，约33亿人受到感染疟疾 et 间相互作用(Maiera1．，2013)，全面揭示这 的威胁。2013年全球有1亿9千万疟疾报告病些分子机制将有助于人类更有效地预防和控制疟 例，58．4万人死亡(Chan，2014)。能引起人类疾。而完成上述研究工作的前提是获得疟原在红 患病的疟原虫种包括恶性疟原虫Plasmodium 细胞各发展阶段较为精准的虫体材料，即实现对 在人红细胞内生长的疟原虫进行有效的同步化 falciparum、间日疟原虫P．vivax、三日疟原虫 et P．malariae、卵形疟原虫P．ovale、诺氏原虫P． (Tragera1．，1976)。能否达到此目标，将明显 et et a1．，2008；Barber knowlesi五种(Cox-Singh 影响对恶性疟原虫生长周期调节机制以及对其精 et a1．，2011；Kantelea1．，2011)。其中恶性疟原细组学特点的研究质量。 eta1．， 目前常用的疟原虫体外培养同步化处理方法 虫的毒力最强，致死率也最高(Luty 2000)，因此针对恶性疟原虫致病机制的研究具包括浓度分离法(The density osmotic 有重要的意义。 1978)、渗透压分解法(The