斑玉蕈热激蛋白基因hsp70在刺芹侧耳中的转化.pdf

食用菌学报⑥2015．22(2)：8～12 DOI：10．16488／j．cnki．1005—9873．2015．02．002 斑玉蕈热激蛋白基因庇sp70在刺芹侧耳中的转化 徐丽丽，范晓洋，于雯楠，王旭锋，郭立忠+ (青岛农业大学山东省应用真菌重点实验室，山东青岛266109) 摘 m口rmore“s)热激蛋白基因^印70通过农杆菌介导的方法对刺芹侧耳 要：将斑玉蕈(协芦izyg“s (Pk“ro￡Ms ery，l鲥i)进行遗传转化，PcR验证得到刺芹侧耳抗性转化子。试验表明：潮霉素浓度为70肛g／mL， 乙酰丁香酮(AS)浓度为200“m01／L，侵染时间为90min，共培养时间为2d时转化率最高。 关键词：热激蛋白基因h印70；遗传转化；刺芹侧耳 Shock 热激蛋白(Heat Protein，HSP)又称导法将白藜芦醇合酶基因(坶)和潮霉素抗性基 热休克蛋白或热应激蛋白，是细胞或生物体在受 因(庇础)共转化人刺芹侧耳，获得成功表达的 到高温等逆境刺激时新合成的或含量增加的一 菌株[10|。 类蛋白质，根据其相对分子质量、结构及功能可 青岛农业大学山东省应用真菌重点实验室 以分为5大类：HSPll0，HSP90，HSP70，HSP60在对高温胁迫条件下斑玉蕈(H阳sizygMs 及小分子量热激蛋白sHSP家族[1]。热激蛋白广m口rmDreMs)菌丝体蛋白表达差异分析的基础 泛分布于各种生物体内，是生物对逆境胁迫短期 上n1|，以刺芹侧耳双核菌丝为受体，将克隆得到 适应的必需组成成分，在抑制细胞凋亡，延缓衰 的斑玉蕈热激蛋白庇sp70基因(专利号 CN200910085438．3，全长2308 老，增强肿瘤免疫原性，以及植物对非生物胁迫 bp，编码666个 环境的应答、抗病性及植物发育中起着重要作 氨基酸)，通过农杆菌介导的方法导入刺芹侧耳 用[2。]，目前还没有关于热激蛋白在真菌中表达 中，以潮霉素磷酸转移酶基因(|}zph)为筛选标记， 的报道。 最终获得多个抗性转化子，并进行相关抗逆性研 究，为食用菌遗传转化和菌种选育研究提供必要 刺芹侧耳(PfeMrofMsPry，l∥f)是一种品质优 良的肉质伞菌，菌丝生长温度为5～35℃，适宜 的技术支持。 生长温度为20～30℃[4。5]。 1材料与方法 目前对刺芹侧耳的研究主要集中在菌种选 育、栽培技术、活性物质提取，以及遗传多样性 1．1供试菌种与质粒 刺芹侧耳(Pk“rDfMs 分析等方面，而遗传转化研究起步较晚。最早 e，y凡∥i)菌株 报道为2010年NoH等用限制性内切酶介导方 法，将增强型青色荧光蛋白基因(e c_加)转入刺 东省应用真菌重点实验室(以下简称“本实验 芹侧耳菌丝获得表达[6]。同年，CHUNG和 KIM等以农杆菌介导法，将重组人类白介素 室”)保存，农杆菌(AgrD6口c把riMmfMm哆向cfens) (interleukin．32)基因和人生长素(growth hormone)基因导入刺芹侧耳中[7。8]。2012年尹 供。重组质粒PHspHyg由本实验室构建(图1)， 永刚等采用PEG／CaCl。介导法把绿色荧光蛋白