布鲁氏菌Omp25对胚胎滋养层细胞炎性机制初步与研究.pdfVIP

中 文 摘 要 目的：布鲁氏菌病（brucellosis ）(以下简称布病)是由布鲁氏菌引起的人、畜共患传染 病，广泛分布于世界各地。布病对我国经济建设、人民健康生活、国家安全等存在着严 重的威胁。布病的病原为布鲁氏菌，是一种胞内寄生菌,它的致病机制以胞内生存为主要 特征。胚胎滋养层细胞是布鲁氏菌感染的靶细胞，一旦被破坏，容易引起流产，但是其 分子机制目前还不清楚。布鲁氏菌外膜蛋白和Ⅳ型分泌系统家族蛋白与布鲁氏菌的侵 染、胞内生存、繁殖有直接关系，是公认的毒力因子。通过探讨毒力因子对感染靶细胞 的作用成为研究布鲁氏菌致病机制的分子基础，为探索布病药物作用的候选靶点奠定理 论基础。 方法：（1）以pET32a为载体，构建了原核表达载体pET32a-omp25，经IPTG诱导在大肠 杆菌中得到了表达 43.5KD Omp25融合蛋白，并成功分离纯化蛋白。（2）以真核表达 质粒pEGFP为载体，将omp25 基因克隆至EGFP 基因上游，构建表达Omp25-EGFP融合 蛋白的真核表达载体pEGFP-omp25 ；（3）根据omp25核苷酸序列，分别构建siRNA-a/b/c 三个干扰载体，应用脂质体，将pEGFP-omp25 分别与siRNAs共转染HPT-8细胞，实时 定量PCR筛选最优干扰质粒