温度敏感性材料培养的脂肪源性干细胞作为眼表重建种子细胞的可行性研究.pdfVIP

主堡塞堕竖型苤查!!!!至!旦筮!!鲞筮!塑鱼!!!!垦!PQ吐!!!!竺!!!!!E堡竺!笪!!!!：!!!：!!：堕!：! ·78l· ·实验研究· 温度敏感性材料培养的脂肪源性干细胞作为 眼表重建种子细胞的可行性研究 韦巧玲徐建江 【摘要】 背景组织工程角膜学的发展为角膜盲的治疗提供了新的选择，但目前暂未发现培养方法简 单、可行性好的角膜上皮种子细胞和理想的支架材料。研究表明，脂肪源性干细胞(ADSCs)具有自我更新能 力同时也具有类上皮的特质，而温度敏感性材料(TRSs)作为支架进行干细胞培养也为细胞层片技术的进步 提供了技术支撑。 目的 研究兔ADSCs在TRSs上的培养特性，并与经典的口腔黏膜上皮细胞(OMECs)特 方法 性进行比较，探讨ADSCs作为眼表重建种子细胞的可行性。 异丙基丙烯酰胺溶于二丙醇后均匀涂于 直径35mm的聚苯乙烯培养皿表面，利用电子束照射制备TRSs，兔颈背部皮下脂肪组织2～3 g经消化培养后 获得ADSCs，同时取出兔口腔黏膜组织进行消化培养，获得OMECs。将2种干细胞均接种于TRSs上继续培 养，比较2种细胞形态、生长速度、脱附时间和成活细胞的总计数，将ADSCs层片和OMECs层片行组织病理 学检查，观察2种细胞的形态特征；采用免疫组织化学法检测2种细胞中干细胞标志物和上皮细胞标志物的 表达；应用扫描电子显微镜检查2种细胞层片的表面超微结构。 结果 自制TRSs透明性和光滑度与普通培 养皿接近，任意观察的5个样品中有4个水接触角100，成功率为80％。TRSs上培养的ADSCs呈长梭形， OMECs呈不规则圆形。ADSCs生长周期在TRSs上为12～14d，脱附时间为(46．0±9．6)min，细胞总计数为 (7．9±1．1)×105／片，而TRSs培养的OMECs生长周期为14—16d，脱附时间为(91．9+10．9)min，细胞计数为 (45．8+26．5)x105／片，2种细胞间层片脱附时间和细胞计数的差异均有统计学意义(P=0．002、0．028)。组 织病理学检查显示，TRSs上的ADSCs呈1—3层排列，而OMECs呈4～5层覆层结构。免疫组织化学染色显 示，ADSCs和OMECs细胞层片细胞角蛋白12(CKl2)及干细胞标志物p63、ATP结合转运蛋白G超家族成员2 (ABCG2)均呈阳性表达。扫描电子显微镜下观察可见ADSCs和OMECs表面均有致密的上皮微绒毛结构，细 胞间连接紧密。 结论 自制的TRSs可作为脂肪干细胞的培养支架，ADSCs取材广泛，TRSs上培养的ADSCs 层片细胞活力好，可操作性强，可作为眼表重建新的种子来源。 【关键词】 组织工程角膜；细胞培养；脂肪源干细胞；口腔黏膜上皮细胞；生物标志物／代谢；细胞 层片技术；眼表重建；兔 of tissue-derivedstemcellsheetfabricatedexvivoon scaffoldsas Feasibilityadipose temperature-responsive seedcellsforocularsurface reconstructionWei Jianjiang．Departmentof and Qiaoling，Xu Ophthalmology，Eye ENT Fudan 200031．China Hospitalof University。Shanghai Correspongdingauthor：Xu Jianjiang，Email：jianjiangxu@126．con ofcornealtissue createsanew methodfor [Abstract】BackgroundDevelopment en