短QT综合征分子遗传及其细胞电生理机制的研究.pdf

＼‘j 摘要 摘要 背景和目的： f刚 短QT综合征(shortQTsyndrome，SQTS)是一种新发现的，以短QT cardiac 期伴室性心动过速(室速)、心源性猝死(suddendeath，SCD)、阵发性 心房颤动(房颤)为特征，而心脏结构『F常的一类遗传性离子通道疾病。到目 前为止，已先后发现6个编码钾通道和钙通道亚单位致病基IN(KCNH2、KCNQl、 遗传性心脏离子通道病。LQTS和SQTS是表型相反的两种心脏复极化异常疾病。 突变导致SQTS相反表型．LQTS。SCN5A基因，负责编码心脏电压门控钠离子 通道Ⅱ亚基一Navl．5。已证实，SCN5A基因功能获得突变导致LQTS。然而，迄 今为止，尚无SCN5A基因突变在LQTS相反表型一SQTS中的报道。 据目前资料信息，除了国人SQTS中发现KCNH2基因突变报道外，系统性 对国人SQTS的研究报道罕见。因此，筛查我国SQTS患者的致病基因及其突变 位点，揭示国人SQTS分子遗传机制及电生理发病机制是本研究主要目标。结合 国人SQTS基因型研究结果，初步筛选有效的针对国人SQTS的抗心律失常药物， 是本研究另一个目的。 材料和方法： 临床资料收集 按照国际短QT综合征诊断指南(国际心电图指南2010)，收集QT间期缩 短(QTc、370 ms)的患者以及家族成员资料。所有患者进行详细临床评估，以及 排除继发性QT问期缩短因素。 基因筛查 直接测序法进行筛查。100个相同种族背景的健康个体作为对照，以鉴别罕见基 摘要 因突变与普通基因多态性。根据最新SQTS诊断标准，对每位患者进行评分。 体外突变诱导及细胞转染 通过定点突变诱导技术，对携带野生型SCN5AcDNA的pcDNA3．1+进行突 E428G 变诱导。 诱导突变引物如下： 『F向引物 并口 反 向 弓I彩刁 5’gctgagaccgGggagaaggaaaagcgcttcca93’ V1951L 正向引物 sense 5’ 5’ttccttctccCcggtctcagcgatggtggctt93’； primer 3’ 矛口 反 向 弓I 4j可primer atcgcctacTtgatgagtgagaacttctc S1653S 正向引物 sense 5tcactcatcaAgtaggcgatgaggccctc3’： primer 和 反 向 引 物 5’tgccctcatgatgtcActgcctgccctcttcaacatc93’ R689H 正 向 弓I彩刁 5’tgaagagggcaggcagTgacatcatgagggcaaagagc3’． 变诱导后进行DNA测序验证，以及排除由PCR导致非目的碱基改变。通过脂 质体转染突变型及野生型SCN5A表达质粒，至人胚。肾(HEK)293细胞进行表达。 细胞膜片钳电生理分析 应用全细胞膜片钳技术对HEK293细胞表达的离子通道功能进行检测。分 析野生型通及突变型通道的电生理特征，如电流密度、峰值，门控特性如电压 依赖