乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织谷氨酸与代谢酶和转运体影响实验及研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织谷氨酸及其代谢酶和转运 体影响的实验研究 刖 吾 拟除虫菊酯(Pyrethroids，PD)类农药是以天然除虫菊酯为基础发展起来的具有 高效、低毒、低残留等特点的一类杀虫剂，主要用于农业和卫生害虫的防治。随 着PD的广泛使用，其对哺乳动物神经系统的毒性作用已成为毒理学领域的研究 热点。 谷氨酸(Glutamate，Glu)是哺乳动物中枢神经系统中最重要的兴奋性神经递 质，也是一种潜在的神经毒素。大量研究表明，Glu递质传递紊乱在PD的兴奋性 神经毒性中起着至关重要的作用。研究发现，溴氰菊酯染毒大鼠大脑皮层、海马 和小脑中Glu含量显著增加，氯氰菊酯或氯菊酯染毒大鼠大脑皮层、海马Glu没 有升高反而显著降低，关于PD对Glu水平的影响尚存争议。 由于Glu不能穿过血脑屏障，释放入突触间隙的神经递质可通过酶解、重摄 取及扩散等方式灭活，以防止其对受体过度刺激。突触间隙内过多的Glu主要通 过星形胶质细胞(Astrocytes，AC)膜上的谷氨酸转运体(GlutamateTransporters， GluTs)将Glu转运到细胞内，从而维持突触间隙内Glu水平。谷氨酸转运体．1 (Glutamate 在中枢神经系统内广泛分布。GLT．1在终止Glu神经能神经传递，维持细胞外液 Glu浓度处于正常水平发挥重要作用。文献报道，在体外PD可致GluTs摄取功能 下降，关于PD对Glu摄取功能影响的体内研究国内外未见报道。 谷氨酰胺合成酶(Glutamine 存在突触囊泡中，当受到刺激后又被释放到突触间隙。研究表明，乙体氯氰菊酯 染毒小鼠脑组织GS活性降低，该药对PAG影响的研究尚未见报道。 乙体氯氰菊酯是目前应用较为广泛的II型PD类农药。本研究通过对乙体氯 mRNA水平的研究，探讨PD的神经毒性，为该类农药的中毒防治提供科学依据。 材料与方法 一、动物分组及染毒 健康成年昆明种小鼠按体重随机分为4组，雌雄各半，一次经口灌胃方式分 别给予0、20、40、80 mg，l(g剂量的乙体氯氰菊酯，灌胃量为0．2rnl／109体重，以 食用色拉油稀释受试物质，对照组给予等量色拉油，分别于染毒后2h、4h，乙 醚麻醉处理，取脑组织供试。 二、观察指标及检测方法 (一)症状观察 染毒后连续观察并记录小鼠中毒症状出现的时间、中毒表现及死亡情况。 (二)Glu水平 采用高效液相色谱法检测小鼠脑组织Glu水平，检测结果以每毫克脑组织含 Glu微摩尔数表示。 (三)GluTS摄取能力 用预冷的0．32mol／L蔗糖溶液将小鼠脑组织制成10％匀浆液，提取突触小体， 考马斯亮蓝法测定蛋白含量，在闪烁计数器上以3H谱道测定样品的放射活性， GluTs摄取能力以每毫克组织蛋白每分钟计数表示。 (四)PAG活性 用预冷PBS匀浆液将脑组织制成10％匀浆液，采用分光光度计法检测PAG 活性，考马斯亮蓝法测定蛋白含量，检测结果以每分钟每毫克组织蛋白催化生成 Glu微摩尔数表示。 (五)PAG、GLT-1mRNA水平 Green 逆转录为cDNA，采用SYBR 2 为该基因的相对表达量。 三、统计分析 计量资料数据用x姆表示，用SPSSl3．0统计软件进行单因素方差分析，组间 两两比较用LSD法，检验水准a--0．05。 ’ ．· 结；日爿c果 一、症状观察 80 h后出现舔身、不安、抓搔等轻微兴奋症 mg／kg剂量组全部小鼠于染毒1 状，2h后陆续出现流涎、痉挛、共济失调等中毒症状，其中1只雌鼠出现濒死状 态；40 h后出现轻微兴奋症状；20 mg／kg剂量组个别小鼠于染毒2 mg／kg剂量组 小鼠在整个受试期间未见异常，实验期间无动物死