DNA重组技术的基本工具(新人教版选修)..pptVIP

* * * ①基因工程载体需要具备的条件 ②利用 PCR 技术扩增目的基因 ③基因治疗的应用 ④蛋白质工程和基因工程的关系 ①DNA 重组技术的基本工具 ②基因工程的基本操作程序 ③基因工程在农业和医疗等方面的应用 ④蛋白质工程的原理和意义 专题难点 专题重点 专题1 基因工程 __________水平 操作水平 基因 操作对象 生物体外 操作环境 基因重组 实质 赋予生物以新的遗传特性，创造出符合人们需要的新 的________________和生物产品 目的 基因拼接技术或 DNA 重组技术 别名 1.1 DNA 重组技术的基本工具 基因工程的概念 生物类型 DNA分子 DNA 重组技术的基本工具 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”。 (1)来源：主要从______________生物中分离纯化出来。 (2)种类：迄今已分离出约 4 000 种。 (3)作用：识别特定的________________序列，切割特定的 两个核苷酸之间的____________________。 (4)结果：产生黏性末端或____________。 原核 核苷酸 磷酸二酯键 平末端 2．DNA 连接酶——“分子缝合针”。 (1)作用：恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的___________， 使双链 DNA 片段“缝合”起来。 (2)类型： ①E·coli DNA 连接酶： a．来源：大肠杆菌。 b．作用：使双链 DNA 互补的黏性末端之间连接。 ②T4DNA 连接酶： a．来源：T4 __________。 b．作用：既能使黏性末端连接也能使平末端连接，但后者 效率较低。 磷酸二酯键 噬菌体 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”。 (1)种类：________、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 (2)质粒的本质：小型环状双链 DNA。 质粒 基因工程原理及特点 1．原理：外源基因在受体细胞中能够表达。 (1)DNA 是生物的主要遗传物质，不同生物间 DNA 分子的 结构基本相同。 (2)不同生物进行基因表达时都遵循“中心法则”：即 (3)所有生物共用一套密码子。 2．特点： (1)在 DNA 分子水平上进行操作。 (2)在体外进行人为的基因重组。 (3)是一种按照人们的意思，定向改造生物遗传特性的技 术。 限制性核酸内切酶的特点和种类 1．特点： (1)主要切割外源 DNA，而对自身的 DNA 不起作用，达到 保护自身的目的。原因是原核生物中不存在该酶的识别序列或 识别序列已经被修饰。 (2)具有特异性，识别特定的核苷酸序列，并在特定的部位 进行切割。 2．产物：用限制性核酸内切酶切割形成的 DNA 片段末端 有两种形式，即黏性末端和平末端。 (1)黏性末端：是限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线 两侧将 DNA 的两条链分别切开时形成的。如下图所示： (2)平末端：是限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线处 切开时形成的。如下图所示： 与 DNA 技术相关的酶 1．限制酶与 DNA 连接酶的关系： 合成新的 DNA 分子 将存在的 DNA 片段连 接成重组 DNA 分子 作用结果 将单个核苷酸加到已存在的核 酸片段的 3′端的羟基上，形成 磷酸二酯键(用于 DNA 的复制) 在两个 DNA 片段之间 形成磷酸二酯键(用于 基因工程操作) 作用过程 单链 双链 连接的 DNA 链 需要 不需要 是否需要模板 都是催化两个核苷酸之间形成磷酸二酯键 作用实质 DNA 聚合酶 DNA 连接酶 2．DNA 连接酶和 DNA 聚合酶的区别： 形成单链 DNA 分子 碱基对间的氢键 DNA 分子 DNA 解旋酶 形成脱氧核苷酸 磷酸二酯键 DNA 分子 DNA(水解)酶 形成新的 DNA 分子 磷酸二酯键 脱氧核苷酸 DNA 聚合酶 形成重组 DNA 分子 磷酸二酯键 DNA 分子片段 DNA 连接酶 形成黏性末端或平 末端 磷酸二酯键 DNA 分子 限制酶 作用结果 作用部位 作用底物 项目 种类 【拓展延伸】几种酶的比较： 载体的作用、种类及具备条件 1．作用： (1)作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 (2)利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 2．具备的条件： (1)能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 (2)有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 (3)具有特殊标记基因，以便进行筛选。 3．种类： (1)常用载体——细菌质粒：一种裸露的、结构简单、独立 于细菌拟核 DNA 之外，能够自我复制的很小的双链环状 DNA 分子。 (2)其