17β-雌二醇对人精子功能的非基因组调节效应及其机制的研究.pdfVIP

17 硕士论文 B一雌=醇对人精子功能的非基因组调节效应及其机制的研究 17 13一雌二醇对人精子功能的非基因组调节效应 及其机制的研究 生理学专业 研究生顾雪蓓 指导教师何亚平 摘 要 受精是生物完成繁衍后代使命必须历经的重要过程，受精受到多方 面因素的制约和影响。精子进入雌性生殖道后，经过重重淘汰筛选，到 达输卵管的壶腹部，此过程中精子发生了结构和功能的变化即精子激 活，最终才能穿过透明带，实现与卵的接触、融合并完成受精过程。精 子激活的主要表现为细胞内钙离子浓度的升高，顶体反应，超激活运动 和受精能力的获得。精子的激活受到许多生物因素的调节，目前有关精 子激活的分子机制及其影响因素尚未完全阐明。有研究表明，女性生殖 道中各种激素的水平尤其是雌激素浓度远远高于血液中的基础水平，雌 激素可能影响人和一些动物精子功能及受精能力；如雌激素可以提高精 子胞内钙离子浓度，增强精子运动能力及相关蛋白的表达。有实验证明， 雌激素可能通过与精子膜上的受体或结合位点相结合，可能是通过非基 因组效应实现其对精子功能的快速调节效应。但是，目前国内外的研究 都尚未阐明雌激素非基因组效应的具体作用机制及参与的信号转导通 路，也尚未成功分离出雌激素的膜受体，其化学结构、生物学功能特点、 1 硕士论文 17 B一雌二醇对人精子功能的非基因组调节效应及其机帝l的研究 以及基因定位等都有待进一步研究。 13 为此进行了以下研究：第一，用不同浓度偶联牛血清白蛋白的17 一雌二醇(E2一BsA)短时间处理人精子，运用计算机辅助精子分析系 统检测精子活动力，以人精子穿透去透明带金黄地鼠卵异种体外受精实 验检测精子受精率，观察雌激素对精子运动能力和受精能力的影响。第 二，用不同跨膜信号转导通路特异性抑制剂阻断相应跨膜信号转导后， 再用E2--BSA处理精子，采用流式细胞术检测精子胞内钙离子浓度变 化，以证明参与E2一BsA对精子非基因组效应的信号转导通路。第三， 白的激活情况，以进一步确定参与非基因组效应的信号转导下游路径， 探讨雌激素非基因组效应的机制。 实验结果如下： 一、O．5uME2一BsA作用后，A级精子百分比、平均曲线运动速 高， M 但与作用前相比差异不具有显著性(Po．05)；l|lE2--BSA作 p M 但对VSL作用无显著差异(PO．05)。 rate 二、自身对照受精率偏低(fertilizationFR30％)的精子，经 O．5uM ll E2一BsA作用后其受精率改变并无明显差异(Po．05)；经l M pM E2一BSA、5 uM M 身受精率较高(FR30％)的精子，经O．5E2--BSA、l|IE2--BSA IIM 作用后其受精率并无明显改变，P0．05；5E2--BSA作用后精子受 2 硕士论文 17口一雌二醇对人精子功能的非基因组调节效应及其机制的研究 精率降低(PO．05)。 三、腺苷酸环化酶特异性抑制剂SQ22536、磷脂酶c特异性抑制剂