2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析.pdfVIP

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2015，46(7)：1310-1314 ISSN 2095—1191；CODEN NNXAAB http：／／www．nfnyxb．ca DOI：10．3969~：issn．2095—1191．2015．7．1310 2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析 胡巧云 ，袁小宁 ，熊 毅-，何奇松-，黄胜斌 ，孙翔翔 ，吴 军 ， 颜健华 ，冯淑萍 ，李 军 ，郭建刚 (广西动物疫病预防控制中心，南宁 530001； 广西大学 生命科学技术学院，南宁 530005) 摘要：【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(SspA)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免 疫原性，为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。方【法】针对SspA基因上、下游序列分别设计1对引物，从112 株2型猪链球菌临床分离株 中扩增其相应片段 ，并进行测序分析；同时以SspA基因的重组质粒pET28a．SspN、 pET28a，SspM-~pET28a一 c分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达 ，再以SDS．PAGE检测融合蛋 白表达情况，Westernblotting鉴定其免疫原性。【结果】SspA~因上游片段较保守，而下游片段变异区间较大。在IPTG 诱导下 ，含有重组质粒pET28a．SspN、pET28a．SspM~pET28a．SspC的菌株表达出3段融合蛋白，其中，SspN和SspC重 组蛋白存在于破碎菌体的上清液中，而SspM重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中，其大小为 ：SspN重组蛋白66kD， SspM重组蛋白65kD，SspC重组蛋白32kD。Westernblotting鉴定结果显示 ，3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血 清发生反应，~t．I)．2SspN重组蛋白反应最强烈 ，而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球 菌SspA基因上游片段较保守，经大肠杆菌重组表达的SspN蛋白免疫原性较强，且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫 的潜力，可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。 关键词：2型猪链球菌；SspA基因；分段表达；免疫原性 中图分类号 ：$858．28 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2015)07—1310—05 SequenceandimmunogenicityofSspA genefrom Streptococcussuistype2 HUQiao-yun，YUANXiao-ning，XIONGYi，HEQi—song，HUANGSheng—bin， SUNXiang-xiang，WUJun，YANJian-hua，FENGShu-ping，LiJun，GUOJian-gang (IAnimalDiseasePreventionandControlCenterofGuangxi，Nanning530001，China；CollegeofLifeSciencesand Technology，GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：O【bjective】InordertolaytheofundationfordiagnosisandvaccineresearchofStreptococcussuistype2 (S．suis2forshort)，thepresentexperimentwasconductedtostudyS．suis2subtilisin-likeserineprotease(SspA)gene’s sequencefeaturesandimmunogenicityofrecombinantproteinexpre