丹参中丹参酮Ⅰ和二氢丹参酮Ⅰ的抗肿瘤活性及其作用机制的研究.pdfVIP

目 录 摘要……………………………………………．．I 缩略词表…………………………………………vI 前言……………………………………………．．11副百……………………………………………．． 丹参酮I、二氢丹参酮I的提取纯化……………………．4 实验材料与试剂…………………………………．4 实验方法与结果…………………………………．4 结论与讨论……………………………………．．8 本章小结………………………………………．9 0 丹参酮I、二氢丹参酮I抗肿瘤活性评价………………．．1 0 实验材料与试剂…………………………………1 实验方法………………………………………11 实验结果………………………………………15 讨论…………………………………………．17 本章小结………………………………………19 丹参酮I对MGC一803细胞抗肿瘤机制的研究………………20 实验材料………………………………………20 实验方法………………………………………21 实验结果………………………………………24 实验结论与讨论…………………………………26 本章小结………………………………………28 总结与展望………………………………………．29 附录……………………………………………．31 综述：丹参的化学成分及药理作用研究概况……………31 参考文献………………………………………38 3 发表论文………………………………………4 致谢…………………………………………．44 摘要 研究背景：丹参为唇形科植物丹参(Salvia 的干燥根及根茎，始载于《神农本草经》，是常用的活血化瘀中药， 已成为治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞等心血管疾病的常用药物， 也是药用植物研究的热点。 目前，已经知道的丹参的化学成分主要包括水溶性的丹参酚酸 类成分如丹参酚酸B等以及脂溶性的丹参酮类成分如丹参酮I、丹 参酮IIA、二氢丹参酮I、次丹参酮、隐丹参酮等，其中丹参酮为主 要的抗肿瘤成分之一，它们通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和分 化来发挥抗肿瘤、抗癌的作用。本文就丹参酮的这一特点，来改进 和优化丹参中丹参酮I、二氢丹参酮I的提取分离方法，探讨丹参 酮I、二氢丹参酮I的抗肿瘤活性，研究其抗肿瘤机制，为寻找生 物活性更好的化合物开辟了新的途径，同时也为丹参作为新型的抗 肿瘤中药提供了强有力的科学依据。 目的：采用传统的植物化学分离技术从丹参中分离、纯化并得 到化合物丹参酮I、二氢丹参酮I。并通过MTT法筛选出丹参酮I、 二氢丹参酮I的抗肿瘤活性，初步确定丹参酮I、二氢丹参酮I起 抑制作用的肿瘤细胞。通过细胞凋亡实验及实时定量RT—PCR法探讨 丹参酮I对肿瘤基因表达的影响，推测其抑制机制。 方法：(1)丹参酮I、二氢丹参酮I的提取纯化：通过硅胶柱， 凝胶柱层析的分离方法对丹参80％甲醇大孔树脂部位反复洗脱。 (2)MTT法检测丹参酮I、二氢丹参酮I的抗肿瘤细胞增殖活 养18小时后，给予三个不同浓度的药液，分别培养24、48、72小 时后，加入适量的MTT溶液，测定不同浓度的药物在不同时间下， 其对肿瘤细胞抑制率作用的影响。 (3)流式细胞仪检测细胞周期的改变以及凋亡情况：人胃癌细 胞MGC-803接种于6孔板中，培养24小时，确定细胞凋亡的情况。 取同一浓度不同时间段给药细胞的RNA，将其逆转录成CDNA，扩增、 跑胶，确定基因的调节情况。 结果：(1)丹参酮I、二氢丹参酮I对人乳腺癌细胞MCF一7几 乎没有生长抑制作用，对人胃癌细胞MGC-803有很明显的生长抑制 作用。 的细胞周期，使细胞核裂解呈现碎片状而产生凋亡小体，且其凋亡 率成明显的上升趋势。